生长抑素联合清胰汤对肠道白色念珠菌感染小鼠的实验性研究

摘要

目的:
　　利用生长抑素（Somatostatin，SST）联合中药清胰汤合剂（QingYitang,QYT）干预肠道白色念珠菌感染的小鼠，观察肠道组织中HE染色、肠道组织病理学评分、CFU菌落计数、用Tunel法及免疫组化技术检测肠道组织凋亡细胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表达，对比采用单一及联合应用生长抑素和中药清胰汤合剂进行干预，研究探讨其对其肠粘膜屏障保护作用的可能机制。
　　方法
　　取健康SPF级（Specefic pathogen Free,无特定病原体）昆明雌性小鼠100只，体重18-20g，4周龄，采用随机分组方式抽取20只为空白对照组（N）；80只用于建造肠道白色念珠菌感染造模组，分组后各组小鼠的体重无明显差异。两周后，从正常对照组及造模组中各随机抽取5只小鼠，取其肠道组织行CFU菌落及时、HE染色并光学显微镜下观察，证实肠道感染白色念珠菌模型成功。将造模组剩余的64只小鼠（造模期间死亡11只）采用随机分组方式分成模型组及实验组（生长抑素组、清胰汤、联合用药组），分别进行药物干预治疗。生长抑素组小鼠给予浓度为0.08mg/ml生长抑素尾静脉注射，0.2ml/只，Q6h；清胰汤组小鼠给予清胰汤灌胃0.5ml/只,Q6h；生长抑素+清胰汤联合用药组小鼠按前述方法同时等量给药；空白对照组及模型组在同一时间给予等量生理盐水尾静脉注射或灌胃；药物等量持续干预7天，连续观察小鼠一般情况；干预治疗后及空白对照小鼠，采用颈椎脱臼法将其处死，无菌取出小鼠的回肠末端、回盲部及右半结肠部分的肠道组织进行HE镜下观、肠道内容物的白色念珠菌菌落计数、肠道组织病理学评分、用Tunel法及免疫组化技术检测肠道组织凋亡细胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表达，同时采用图像分析系统对其结果进行量化分析。所有实验数据均采用均数±标准差（x±S）的方式表示，结合SPSS18.0统计软件进行分析。
　　结果
　　1、模型成功率为86.25％。
　　2、一般情况：大体观察可见空白对照组小鼠一般情况好，活泼好动、毛发有光泽；模型组小鼠可见精神差、饮食减少、基本不活动、毛发散乱、无光泽等；治疗组小鼠精神较好，稍有活动，毛发稍有光泽；麻醉消毒，打开腹腔后，发现空白对照组小鼠肠道组织无明显异常，组织红润，肠蠕动功能正常；而模型组小鼠出现肠管壁充血及水肿、部分有肠管坏死，肠腔胀气，腹腔有少量暗红色积液；治疗组小鼠为肠道组织颜色稍红润，管壁稍有充血及水肿，肠腔胀气消失。
　　3、肠道内容物白色念珠菌菌落（CFU）计数情况：空白对照组、模型组、生长抑素组、清胰汤组、联合用药组肠道内容物均出现不同程度的白色念珠菌生长，在科玛嘉培养基上呈现翠绿色的光滑菌落；通过菌落培养计数，证实白色念珠菌菌落计数与空白对照组相比，模型组明显增多（P<0.05），药物干预后，治疗组的菌落计数均有不同程度下降，有差异性（P<0.05），以联合用药组最为显著（P<0.05）。
　　4、病理学检测及病理学评分：光学显微镜下空白对照组小鼠肠道组织腺体结构排列整齐、完整，粘膜及粘膜下层无毛细血管淤血、腺体肿胀、炎症细胞聚集、弥散分布等特点；模型组小鼠肠道组织可见上皮下间隙增大，粘膜及粘膜下充血肿胀，腺体排列紊乱，毛细血管及微小静脉扩张充血，肠粘膜细胞坏死、脱落，可见炎性细胞聚集、浸润，病理学评分结果证实，两组相比有显著的差异性（P<0.05）。药物干预后，治疗组粘膜层及粘膜下层、固有层间隙变小，腺体排列稍整齐，血管稍有扩张，脱落及坏死减轻，可见少量炎性细胞在肠腔内存在，病理学评分结果以联合用药组最为显著（P<0.05）。
　　5、肠道粘膜细胞的凋亡检测及凋亡指数：肠粘膜凋亡检测细胞表达部位在细胞核处，阳性细胞表达。空白对照组可见少量凋亡细胞，模型组小鼠粘膜细胞可见细胞体积缩小、变形，与周围的细胞间隙增大，胞质浓缩、胞膜裂解成块状，严重者可见以凋亡小体形成等特点的凋亡细胞，细胞核中呈现棕黄色或黄褐色。药物干预后，在肠道组织病理学评分中凋亡细胞的表达有不同的减轻，与模型组相比有显著差异性（P<0.05）；药物干预后，凋亡细胞有不同程度的表达，以联合用药组差异最为显著（P<0.05）。
　　6、肠粘膜凋亡基因Bax表达：Bax表达部位在包浆处，主要分布于粘膜细胞层及腺体，呈棕黄色阳性细胞表达，有时呈弥散性分布的特点。与空白对照组相比，模型组的Bax表达有统计学意义（P<0.05）。治疗组与模型组相比，Bax表达均有不同程度表达，但它们之间无明显统计学意义（P﹥0.05）。
　　7、肠粘膜凋亡基因Bcl-2表达：Bcl-2表达部位在包浆处，主要分布于粘膜细胞层及腺体，呈棕黄色阳性细胞表达。与空白对照组相比，模型组的Bcl-2表达增加，有统计学意义（P<0.05）。治疗组与模型组相比，Bcl-2表达均有不同程度的增加，以联合组最为明显，有显著差异性（P<0.05）。
　　结论
　　1、生长抑素与中药清胰汤合剂联合应用能够减少小鼠肠道内白色念珠菌的定植数目，减少细胞凋亡，对肠粘膜屏障起到一定的保护作用。
　　2、生长抑素联合中药清胰汤合剂的联合应用对肠粘膜屏障的保护作用更加明显。

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第一章 前言

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

附录

文献综述

成果目录

致谢