静压力通过调节caveolin-1磷酸化抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞胆固醇蓄积

摘要

目的:探讨静压力对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)胆固醇跨膜转运的影响及其机制。
　　方法:原代培养大鼠主动脉VSMCs,取第4-10代与ox-LDL50μg/ml共孵育,用自行研制的压力可调细胞培养箱以不同压力加压处理(0kPa、8 kPa、16kPa和24kPa),发现胆固醇含量减少最明显的压力16kPa后,再用16kPa处理不同时间(0min、5min、30min、60min、90min和120min)。油红O染色法及HPLC观察静压力对VSMCs荷脂的影响;用免疫印迹法检测caveolin-1表达与caveolin-1磷酸化情况;用荧光定量PCR检测ABC-AⅠmRNA转录水平。用下调caveolin-1磷酸化的药物SB203580干预静压力对VSMCs的caveolin-1磷酸化作用,再用油红O染色法及HPLC观察VSMCs胆固醇含量。
　　结果:静压力可以减少ox-LDL诱导的VSMCs胆固醇含量,上调caveolin-1的磷酸化及ABC-AⅠmRNA转录水平;其中16kPa时,VSMCs caveolin-1磷酸化与胆固醇含量减少最明显,ABC-AⅠmRNA转录水平也达到最大值;而随着压力增高,胆固醇含量有所增高,caveolin-1磷酸化及ABC-AⅠmRNA转录水平有所降低。时效上,60min后caveolin-1磷酸化最明显。SB203580可显著抑制caveolin-1磷酸化,从而导致VSMCs胆固醇含量增加。
　　结论:
　　1、静压力可抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞胆固醇蓄积。
　　2、静压力抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞胆固醇蓄积可能与caveolin-1磷酸化及ABCA-ⅠmRNA转录水平升高有关。

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前言

实 验 材 料

一、实验动物

二、主要试剂

三、 仪器及设备

实 验 方 法

1. 贴块法原代培养大鼠VSMCs

2. 实验分组

3. 油红O染色

4. 细胞内胆固醇的检测

5. Western Blot检测静压力处理后大鼠VSMCs中caveolin-1蛋白表达及caveolin-1磷酸化水平

6．实时定量PCR

7．统计学方法

实 验 结 果

1. 静压力对VSMCs生长排列的影响

2. 静压力对VSMCs荷脂的影响

3．静压力对VSMCs caveolin-1表达和caveolin-1磷酸化的影响

4．caveolin-1去磷酸化后对静压力下VSMCs荷脂的影响

5．静压力对VSMCs ABCA-ⅠmRNA表达的影响

讨论

结论

参考文献

综 述 机械应激的血管生物学意义与动脉粥样硬化

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