EZH2介导ABCA1启动子区域DNA和组蛋白甲基化促进动脉粥样硬化进展

摘要

目的：三磷酸腺苷结合盒转运体 A1（ABCA1）是一种重要的膜蛋白转运体，能介导细胞内胆固醇流出，减少泡沫细胞形成，发挥抗动脉粥样硬化（atherosclerosis, As）的作用。研究显示表观遗传学影响 As发生发展，但是 DNA、组蛋白甲基化调控 ABCA1的转录与表达，影响胆固醇流出、泡沫细胞形成以及As发生发展的作用尚不清楚。本研究选取 THP-1/RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞和apoE?/?小鼠为研究对象，探讨表观遗传学对ABCA1表达、泡沫细胞形成以及As的影响。
　　方法：通过生物信息学在线网站预测ABCA1发生DNA甲基化的潜在可能性，并着重分析CpG岛的数量、长度、CG含量、ObsCpG/ExpCpG比值等；本课题组采用荧光定量PCR检测THP-1/RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞mRNA的表达，Western blot检测ABCA1蛋白表达；染色质免疫共沉淀检测甲基化转移酶与ABCA1启动子的结合情况；免疫酶法检测甲基化转移酶以及相关甲基化结合蛋白的活性；shRNA技术沉默甲基化酶后，测定EZH2对ABCA1表达对胆固醇流出的影响；油红 O染色显示细胞脂质蓄积情况；苏丹Ⅳ、HE染色、Masson三色染色检测 apoE?/?小鼠动脉粥样斑块的情况；小鼠心脏标本送上海生工进行甲基化BSP测序。
　　结果：生物信息学分析显示ABCA1定位于9号染色体9q31.1，其启动子区域有一个优于标准定义的CpG岛.其长度为389bp， CG含量为57.4％， observed/expected CpG比值为0.664。此CpG岛在人类以及家鼠、牛等哺乳动物中具有高度保守性，100个碱基序列中有7个相同的CpG位点，并且具有TBP, Myc, FOX和STAT3等转录因子结合位点，得分较高。过表达EZH2增加THP-1/RAW264.7巨噬细胞的脂质蓄积，促进泡沫细胞形成以及As发生发展。过表达EZH2组的胆固醇流出减少，ABCA1表达降低；进一步探讨其机制发现 EZH2能够募集甲基化转移酶1（DNMT1）、CpG岛结合蛋白（MeCP2），使其结合到ABCA1基因启动子区域，并且EZH2能够诱导组蛋白 H3K27三甲基化，而 sh DNMT1则逆转EZH2对ABCA1表达、胆固醇流出的影响，最终抑制泡沫细胞形成与动脉粥样硬化的进展。
　　结论：EZH2介导ABCA1启动子DNA和组蛋白甲基化，沉默ABCA1蛋白表达，抑制胆固醇流出，最终促进细胞内脂质蓄积和As的进展。

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实验材料

实验方法

实 验 结 果

讨论

结论

参考文献

附录

文 献 综 述

攻读学位期间所获科研成果

致谢