二烯丙基二硫下调calreticulin诱导人白血病HL-60细胞分化

摘要

目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）下调calreticulin诱导人白血病HL-60细胞分化，探讨DADS诱导人白血病细胞分化的分子机制。
　　方法：采用Giemsa染色检测形态学的改变， siRNA、MTT、QPCR、Western blot、流式细胞术等方法研究DADS下调钙网织蛋白（calreticulin, CRT）诱导人白血病细胞分化以及沉默CRT在DADS诱导人白血病细胞分化的作用。
　　结果：
　　1.形态学观察DADS对HL-60细胞的影响
　　形态学观察显示，1.25mg·L-1 DADS处理HL-60细胞48h、72 h后，细胞的胞浆丰富，胞核变小，核浆比例缩小。
　　2. DADS对HL-60细胞CRT表达的影响
　　QPCR检测显示，DADS处理HL-60细胞后，CRT可以在mRNA水平表达降低，并呈时间依赖性降低（P<0.05）。Western blot显示，DADS处理HL-60细胞后，CRT蛋白表达随着时间延长逐渐下降（P<0.05）。
　　3.沉默CRT基因对HL-60细胞CRT表达的作用
　　沉默HL-60细胞CRT基因48h和72h后，CRT mRNA表达较对照组分别显著下调(P<0.05)。而DADS处理对照组与干扰组48h和72h组后，CRT mRNA表达分别较对照组与干扰组明显下调(P<0.05)。同时，CRT蛋白表达分别较对照组明显降低(P<0.05)。DADS处理对照组与干扰组48h和72h后，分别较处理前显著下调(P<0.05)。
　　4.沉默CRT基因对HL-60细胞增殖的影响
　　MTT检测显示，在24、48、72、96h各时间段，与对照组相比，干扰组增殖能力呈时间依赖性明显降低(P<0.05)。而 DADS处理对照组和干扰组后较处理前对照组和干扰组亦呈时间依赖性抑制增殖(P<0.05)。
　　5.沉默CRT基因对HL-60细胞CD33和CD11b表达的影响
　　流式细胞术检测显示，沉默HL-60细胞CRT基因表达48h和72h后，CD33表达较对照组分别显著下调(P<0.05)，而CD11b表达明显增加(P<0.05)。并且， DADS处理对照组与干扰组较处理前效果更明显(P<0.05)。
　　结论：
　　1. DADS可下调calreticulin诱导HL-60细胞分化。
　　2.沉默calreticulin可诱导HL-60细胞分化，并增强DADS诱导HL-60细胞分化作用。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

读硕期间撰写的论文

英文缩写注解

致谢