二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞分化差异表达cDNA文库的构建

摘要

目的应用抑制性消减杂交技术构建二烯丙基二硫(diallyl disulfide ,DADS)诱导人白血病细胞分化的消减杂交cDNA文库,以期克隆DADS诱导人白血病HL-60细胞分化的相关基因.方法用DADS诱导人白血病HL-60细胞分化,提取poly A+ RNA,反转录合成cDNA,消化成短片段后分成两组,分别与两种不同的接头连接,再与未处理的白血病细胞cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR扩增,将PCR产物与pGEM-T线性载体连接,转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆进行酶切鉴定.结果成功地构建了具有高消减效率的DADS诱导白血病细胞分化的cDNA文库,随机挑取消200个克隆制备质粒并酶切分析,其中84.5%的克隆均具有100～600 bp左右的插入片段,说明每一克隆中均含有特异性的目的片段,从而为大批量筛选、克隆DADS诱导人白血病细胞分化的相关未知新基因奠定了基础.结论 DADS能诱导人白血病HL-60细胞分化,并引起相关的基因发生改变,而抑制性消减杂交技术能有效地分离差异表达的基因.