缺氧对结直肠癌SW480细胞株增殖转移及相关基因表达的影响

摘要

【目的】
　　在氯化钴化学诱导缺氧微环境条件下，观察人结直肠癌细胞株SW-480细胞体外增殖活力和侵袭能力改变，探讨缺氧对结直肠癌肿瘤生物学行为的影响；检测缺氧诱导因子-1α和上皮型钙粘蛋白的分子表达，分析二者在缺氧反应中的作用和相互关系，为大肠癌防治提供理论依据。
　　【方法】
　　采用氯化钴诱导体外模拟缺氧环境，并以不同浓度的氯化钴培养液代表不同的缺氧程度，将体外培养增殖的SW480细胞按培养条件分为常氧组、低氧组和缺氧组，MTT法检查细胞增殖活力，Transwell法检测细胞侵袭迁移能力，免疫细胞化学法观察HIF-1α和 E-cadherin细胞表达部位，RT-PCR法及 Western-blotting法分别检测 HIF-1α和E-cadherin的mRNA、蛋白的表达水平。
　　【结果】
　　1、MTT检测结果显示随氯化钴浓度增加，SW480细胞的增殖活力逐渐降低；与常氧组相比，低氧组和缺氧组均降低，差异有统计学意义；低氧组和缺氧组之间相比差异有统计学意义；
　　2、Transwell体外侵袭实验结果显示，低氧组和缺氧组细胞穿膜数目较常氧培养组增加，提示SW480细胞转移能力随缺氧程度的增加而逐渐增加；
　　3、细胞爬片免疫化学染色，高倍镜下观察，各组细胞HIF-1α蛋白表达定位细胞核和细胞质，E-cadherin蛋白表达在细胞膜和细胞质，表达部位均未因培养条件不同而变化，但 HIF-1α的表达强度随缺氧程度增加而增加，E-cadherin的表达强度则随缺氧程度增加而降低；
　　4、RT-PCR及 Western-blotting检测显示，随缺氧程度增加 HIF-1α mRNA及蛋白在SW480细胞中表达逐渐增加，而E-cadherin mRNA及蛋白表达逐渐降低，两者反向表达呈负相关，且基因与蛋白表达呈现较好的一致性。
　　【结论】
　　1、缺氧微环境可使SW480细胞株体外增殖活性明显降低、侵袭迁移能力显著增强；
　　2、缺氧可以诱导HIF-1α基因和蛋白的高表达，下调E-cadherin基因和蛋白的表达；
　　3、HIF-1α与E-cadherin在结直肠癌细胞中的表达呈现负相关性，且在基因和蛋白表达水平呈现较好的一致性。

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主要英文缩略词表

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前言

材料与方法

1 实验材料

1.1细胞株

1.2 主要试剂及试剂盒

1.3 试剂的配制

2 实验设备

3 实验方法

3.1 SW480细胞的培养

3.2 MTT实验法检测细胞增殖活性

3.3 Transwell实验法检测细胞侵袭能力

3.4 免疫细胞化学SP法检测HIF-1α、E-cadherin的亚细胞表达定位

3.5 RT-PCR实验检测HIF-1α及E-cadherin mRNA的表达

4 统计学处理

结果

1 MTT实验法检测细胞增殖活力结果

2 Transwell实验法检测细胞体外侵袭能力结果

3 免疫细胞化学SP法检测HIF-1α及E-cadherin表达的细胞定位

4 RT-PCR检测HIF-1α及E-cadherin 的mRNA表达

5 Western-blotting检测HIF-1α及E-cadherin的蛋白表达

讨论

1 缺氧对人结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响及机制

2 缺氧对人结直肠癌SW480细胞HIF-1α表达的影响及其机制

3 缺氧对人结直肠癌SW480细胞中E-cadherin表达的影响和意义

4 HIF-1α及E-cadherin缺氧肿瘤细胞的表达关系及调控机制初探

结论

参考文献

附实验图片

综述

攻读硕士学位期间主要科研与论文汇报

致谢