1-甲基乙内酰脲及顺铂对SGC-7901细胞增殖侵袭迁移的研究

摘要

目的：
　　探讨1-甲基乙内酰脲及顺铂对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制,为临床应用提供实验依据。
　　方法：
　　1、MTT法：检测药物对SGC-7901细胞增殖的抑制效果，分别设四个组：即对照组（等体积PBS溶液）、1-甲基乙内酰脲(M组)、顺铂(DDP)、1-甲基乙内酰脲(M)与顺铂(DDP)联合组。通过予以1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药及不同浓度的处理，检测24h、48h、72h后药物对胃癌 SGC-7901细胞增殖的抑制作用。
　　2、细胞划痕实验：检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞迁移能力的影响；
　　3、Transwell侵袭实验：检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。
　　4、RT-PCR实验：检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞中MMP9、CD44V6 mRNA表达影响。
　　5、Western-blotting检测：1-甲基乙内酰脲、顺铂、和两者联合用药对SGC-7901细胞MMP9、CD44V6蛋白质表达的影响。
　　结果：
　　1. MTT分析法检测结果显示：
　　①1-甲基乙内酰脲和顺铂在0.5-80 umol/L的浓度范围内均能抑制SGC-7901细胞的增殖，其抑制率呈时间、浓度依赖关系，随着浓度或作用时间的增加抑制率增加。
　　②1-甲基乙内酰脲单独作用时，与对照组相比，各处理组均能抑制SGC-7901细胞增殖，有统计学差异(P<0.05)。
　　③顺铂单独作用时，与对照组相比，各处理组均显著性抑制SGC-7901细胞增殖，有统计学差异(P<0.05)。
　　④1-甲基乙内酰脲与顺铂联合作用，同等浓度下对SGC-7901细胞增殖的抑制作用明显优于二者单独作用，具有显著性差异(p<0.01)。
　　2.划痕实验24h后观察结果表明：1-甲基乙内酰脲及顺铂处理的SGC-7901细胞，对照组修复的要比实验组多，宽度变小，实验组的伤痕宽度变化小。在48h后，对照组的划痕变窄，几乎处于愈合，而实验组的划痕变化比对照组小，且两者联合作用时效果更佳。各实验组与对照组差异具有显著性。实验结果显示：用药后肿瘤细胞的运动能力减弱，结果提示：1-甲基乙内酰脲和顺铂能抑制细胞迁移，
　　3．Transwell侵袭实验结果表明：与对照组相比，使用1-甲基乙内酰脲、顺铂和两药联合均能抑制SGC-7901细胞的侵袭，且两药联合对抑制SGC-7901细胞的侵袭效果最佳。
　　4. RT-PCR实验：结果显示，MMP9、CD44V6mRNA在SGC-7901细胞中均有表达。用1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合处理后，SGC-7901细胞中 MMP9、CD44V6 mRNA表达降低。
　　5. Western-blotting实验结果显示：与对照组相比，1-甲基乙内酰脲、顺铂、两者联合用药处理细胞后，MMP9、CD44V6蛋白表达下调，且1-甲基乙内酰脲、顺铂两者联合用药效果最佳，MMP9、CD44V6蛋白表达下调最明显。
　　结论：
　　1．1-甲基乙内酰脲、顺铂均可抑制人SGC7901细胞的生长增殖。联合应用抑制作用增强，呈现协同作用；
　　2、1-甲基乙内酰脲、顺铂可抑制人SGC7901细胞的侵袭与迁移，联合用药抑制作用增强，MMP-9蛋白和CD44V6蛋白表达降低。

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英文缩略词

第1章 前 言

第2章 材料和仪器

2.1实验细胞

2.2实验仪器、设备

2.3实验试剂

2.4试剂的配制

第3章 实验方法

3.1细胞复苏及培养

3.2 MTT法

3.3细胞划痕实验

3.4细胞侵袭实验

3.6 RT-PCR

3.7 WesternBlot

3.8统计学处理

第4章 结果

4.1 MTT比色法检测

4.2、划痕实验检测1-甲基乙内酰脲及顺铂对人SGC-7901细胞迁移的影响

4.3 Transwell侵袭实验检测1-甲基乙内酰脲及顺铂对SGC-7901细胞侵袭的影响

4.4 RT-PCR实验结果

4.5Western blot实验检测SGC-7901细胞MMP-9、CD44V6蛋白表达的影响

第5章 讨 论

第5章 结 论

综述:MMP-9在恶性肿瘤表达调控机制研究进展

参考文献

在读期间发表的论文

致谢