1-甲基乙内酰脲与5-Fu对胃癌SGC-7901细胞抑制增殖及诱导凋亡的研究

摘要

目的：
　　探索1-甲基乙内酰脲与5-氟尿嘧啶单独和两者联合对人胃癌SGC-7901细胞的抑制和诱导凋亡作用。
　　方法：
　　实验对象：体外培养的人胃癌 SGC-7901细胞株。实验分组：对照组（等量PBS）、不同浓度梯度(5mg·L-1,10mg·L-1,20mg·L-1,50 mg·L-1,100 mg·L-1)1-甲基乙内酰脲(M)组、不同浓度梯度(5 mg·L-1,10mg·L-1,20mg·L-1,50mg·L-1,100mg·L-1)5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、1-甲基乙内酰脲与5-Fu(M+5-Fu)联合组(M5mg·L-1+Fu5mg·L-1，M10mg·L-1+Fu10mg·L-1，M20mg·L-1+Fu20mg·L-1，M50mg·L-1+Fu50mg·L-1，M100mg·L-1+Fu100mg·L-1)。MTT比色法检测细胞增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布；Western Blot检测ERK，P53，FAS，FASL蛋白的表达情况。
　　结果：
　　1 MTT分析法检测结果显示：
　　①1-甲基乙内酰脲和5-Fu在5～100 mg·L-1的浓度范围内均能显著性抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖，其抑制率呈浓度、时间依赖关系，随着浓度的增加抑制率增加，随着作用时间的增加抑制率增加。
　　②1-甲基乙内酰脲单独作用时，与对照组相比，各浓度处理下均显著性抑制SGC-7901细胞增殖(p<0.05)。
　　③5-Fu单独作用时，各浓度处理下均显著性抑制SGC-7901细胞增殖(p<0.05)，且在同一作用时间下各浓度处理间均存在显著性差异(p<0.05)。
　　④1-甲基乙内酰脲在相同的浓度下作用效果弱于5-Fu。作用24h后，20 mg·L-15-Fu与50 mg·L-1和100 mg·L-11-甲基乙内酰脲作用效果不存在显著性差异(p>0.05)；作用48h后，10 mg·L-15-Fu与50 mg·L-11-甲基乙内酰脲作用效果相当，差异不显著(p>0.05)；作用72h后，50 mg·L-11-甲基乙内酰脲与10 mg·L-15-Fu及100 mg·L-11-甲基乙内酰脲与20 mg·L-15-Fu作用效果相当，无显著性差异(p>0.05)。
　　⑤1-甲基乙内酰脲与5-Fu联合作用，作用24h后，二者浓度均为50 mg·L-1的联合组作用效果显著性高于100 mg·L-11-甲基乙内酰脲单独作用组，同时其作用效果还显著性低于100 mg·L-15-Fu单独作用组(p<0.05)；作用48h，72h后，50 mg·L-1的联合用药组与100mg·L-15-Fu单独用药组作用效果相当(p>0.05)，而显著性高于100 mg·L-11-甲基乙内酰脲单独作用组。
　　2 FCM及细胞凋亡检测结果显示：相比于对照组，1-甲基乙内酰脲、5-Fu及其二者联合的各浓度处理下SGC-7901细胞凋亡率显著性上升(p<0.05)。与1-甲基乙内酰脲和5-Fu单独作用相比，二者联合作用的SGC-7901细胞凋亡率增加，存在显著性差异(p<0.05)。
　　3 Western Blot结果显示，与对照组相比，1-甲基乙内酰脲处理SGC-7901细胞后，其细胞外调节蛋白激酶(ERK)、抑癌基因(P53)和死亡受体 Fas及其配体 Fas L的表达均无差异；而5-Fu处理SGC-7901细胞后，抑癌基因P53表达无差异变化，细胞外调节蛋白激酶(ERK)和死亡受体Fas及其配体FasL的表达明显上调。
　　结论：
　　1.1-甲基乙内酰脲对体外人胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖及诱导凋亡的作用。
　　2.1-甲基乙内酰脲对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用有剂量和时间依赖性，随着浓度增加、作用时间延长其抑制效果增加。
　　3.1-甲基乙内酰脲在相同的浓度下对胃癌SGC-7901细胞的抑制效果均弱于5-氟尿嘧啶。
　　4.1-甲基乙内酰脲与5-Fu联合使用对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖可能具有相加作用。

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中英文缩略词表

第一章 前 言

第二章 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第三章 数据处理

第四章 技术路线图

第五章 实验结果

5.1 MTT比色法检测1-甲基乙内酰脲单独作用对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制效应

5.2 MTT比色法检测5-氟尿嘧啶单独作用对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制效应

5.3 MTT比色法检测1-甲基乙内酰脲与5-氟尿嘧啶联合作用对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制效应

5.4 1-甲基乙内酰脲、5-氟尿嘧啶单独作用和二者联合作用对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制效果比较

5.5 显微检测1-甲基乙内酰脲、5-氟尿嘧啶及二者联合处理后胃癌SGC-7901细胞形态变化

5.6 流式细胞仪检测1-甲基乙内酰脲、5-氟尿嘧啶及两者联合对人胃癌SGC-7901细胞周期分布及细胞凋亡率的影响

5.7蛋白免疫印迹(Western Blot)检测抑制胃癌细胞增殖及诱导细胞凋亡相关蛋白表达情况

第六章 讨 论

6.1 1-甲基乙内酰脲对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

6.2 1-甲基乙内酰脲与5-氟尿嘧啶对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用比较

6.3 1-甲基乙内酰脲与5-氟尿嘧啶联合作用对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

6.4 1-甲基乙内酰脲对SGC-7901细胞凋亡和周期分布的影响

6.5 1-甲基乙内酰脲与5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡及抑制胃癌细胞增殖的可能途径

第七章 结论

参考文献

综述:胃癌辅助治疗研究进展

在读期间发表的论文

致谢