氧化苦参碱对哮喘大鼠细胞炎性因子IL-17A和IL-10的影响

摘要

目的：观察不同浓度氧化苦参碱（Oxymatrinem，Oxy）刺激哮喘大鼠脾源性单个核细胞后IL-17A、IL-10的变化，以探讨Oxy对哮喘的作用机制。
　　方法：清洁级健康雌性SD大鼠，40只，按照完全随机表，将大鼠分成模型组，低浓度组、中浓度组、高浓度组和对照组，共计5组，每组8只，除外对照组，其他组均以OVA腹腔注射致敏、雾化激发；对照组以等体积的生理盐水替代OVA溶液，在末次激发24h之后处死大鼠，并留取标本。取左肺组织行HE染色，并观察其病理学变化；无菌条件下研磨大鼠脾脏，制成细胞悬液，细胞培养液调整细胞密度至2-3×106个/ml，在低浓度组、中浓度组、高浓度组中加入Oxy溶液，并使其终浓度分别为1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml，而哮喘组和对照组细胞悬液中仅加入完全培养液即可；放入培养箱，静置培养72h后，使用ELISA法测定各组细胞上清液中IL-17 A和IL-10的浓度；使用RT-PCR、Western blot测定各组中IL-17、IL-10基因及蛋白水平的表达。
　　结果：
　　1、HE染色哮喘模型大鼠的肺组织存在大量炎症细胞浸润，气管平滑肌明显增厚，并分泌较多的粘液，出现胶原的沉积。正常对照组肺泡壁薄且光滑，未见明显炎性细胞的浸润，气管平滑肌均匀，无增生；证实哮喘模型复制成功。
　　2、对IL-17A的影响经ELISA、RT-PCR以及Western blot检测IL-17A发现，高浓度组与对照组比较，IL-17A的表达无差异显著性(P＞0.05)，其余各组相对于对照组则显著升高(P＜0.05)；低浓度组与哮喘组相比较，无差异显著性(P＞0.05)，其他组均较哮喘组有显著差异(P＜0.05)。各组 IL-17A浓度分别为(385.46±18.73)pg/ml，(382.21±22.24)pg/ml，(349.64±28.67)pg/ml，(231.67±27.65)pg/ml，(228.52±17.92)pg/ml；各组IL-17A mRNA相对表达量分别为(83.28±15.72)，(78.68±9.06)％，(56.12±7.69)，(32.50±6.43)，(29.89±4.71)%；各组IL-17A蛋白相对表达量分别为(49.94±5.43)，(47.33±1.81)，(29.64±2.74)，(11.59±2.96)，(10.49±1.59)。
　　3、对IL-10的影响经ELISA、RT-PCR以及Western blot检测IL-10发现，高浓度组与对照组比较IL-10的表达无统计学意义（P＞0.05），其他组均较对照组有显著差异性（P＜0.05）；与哮喘组比较，低浓度组的IL-10无明显差异（P＞0.05），其他组均较哮喘组均由明显差异（P＜0.05）。各组IL-10浓度分别为(36.54±7.88）pg/ml、(37.18±6.95）pg/ml、(54.27±6.35)pg/ml，(86.82±7.69)pg/ml，(87.43±10.95)pg/ml，各组IL-10 mRNA相对表达量分别为(3.39±1.86)，(4.01±2.60)，(8.58±1.75)，(25.73±2.59)，(28.73±4.48)；各组IL-10蛋白相对表达量分别为(27.44±4.33)，(30.75±2.52)，(39.44±3.78)，(80.05±4.01)，(83.09±6.85)。
　　结论：
　　1、 Oxy对哮喘大鼠IL-17A基因、蛋白表达，以及外分泌水平均具有抑制作用。
　　2、 Oxy对哮喘大鼠IL-17A基因、蛋白表达，以及外分泌水平均具有促进作用。

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主要英文缩略词

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第1章 绪 论

第2章 材料

2.1 实验动物

2.2 饲养条件

2.3 药品及主要试剂

2.4 主要仪器

2.5 相关试剂配制

第3章 实验方法

3.1 支气管哮喘大鼠模型的建立

3.2 标本采集分组

3.3 BALF 中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞计数

3.4 HE 染色

3.5 ELISA 检测

3.6 RT-PCR 检测

3.7 Western blot 检测

3.8 统计学方法

第4章 结果

4.1 大鼠致敏激发后的一般表现

4.2 HE 染色

4.3 炎性细胞计数

4.4 Oxy 对IL-17A 和IL-10分泌的影响

4.5 Oxy对IL-17A 和IL-10 mRNA表达的影响

4.6 Oxy 对IL-17A 和IL-10蛋白表达的影响

第5章 讨论

第6章 结论

参考文献

综述:氧化苦参碱治疗哮喘的研究进展

研究生学习期间发表的论文

致谢