TRX1/TXNIP在衰老A549细胞氧化/抗氧化失衡中的作用研究

摘要

目的：观察衰老状态下，CSE对A549细胞TXNIP及TRX1表达的影响，并探讨TRX1/TXNIP是否参与了衰老A549细胞氧化/抗氧化失衡及其意义。
　　方法：采用不同浓度的BrdU（0μM、10μM、20μM、40μM）处理A549细胞10天，用SA-β-gal染色、流式细胞术检测细胞衰老的情况；采用合适浓度BrdU复制A549细胞衰老模型，Western blot及免疫荧光进一步验证A549细胞衰老情况；10％CSE处理对照组和模型组12h，并分别设立相应对照组，免疫荧光检测各组细胞内ROS含量，CCK-8检测细胞增殖活力，Western blot检测各组中TXNIP、TRX1的表达情况。
　　结果：
　　1.SA-β-gal染色的结果显示，与0μM组（5.65±0.56）相比，10μM、20μM、40μM各组SA-β半乳糖苷酶染色阳性率均明显增加，分别为66.81±2.05，75.54±3.41，82.25±2.92，差异具有统计学意义（P<0.05）；流式细胞术检测细胞周期结果显示，与0μM组（58.72±2.52）相比，10μM、20μM、40μM各组G0/G1期的细胞比率均明显增加，分别为74.11±3.89，78.18±4.57，76.29±2.76，差异具有统计学意义(P<0.05)，对0μM组（38.38±2.16）而言，10μM、20μM、40μM各组S期细胞比率均降低了，分别为20.50±4.75，16.08±3.40，18.29±3.35差异具有统计学意义（P<0.05），各组 G2/M期细胞比率分别为2.90±0.39，5.39±0.86，5.74±2.12，5.41±2.30，差异均无统计学意义（P>0.05），提示 BrdU能调节细胞周期，使细胞周期阻滞于G0/G1期；Western blot及免疫荧光的结果示，与0μM组（0.22±0.015）相比，10μM BrdU处理组细胞周期抑制因子P21(衰老标志物)的表达显著增加了，为0.61±0.021（P<0.05），综上所述，10μM BrdU成功复制了A549细胞衰老模型。
　　2.DCF检测细胞内ROS含量示，模型组（11.46±0.37）高于对照组（5.73 ±0.28），差异具有统计学意义（P<0.05）；CSE处理组（13.68±0.44，7.16±0.19）均高于未处理组（11.46±0.37，5.73±0.28），差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　3.CCK-8检测细胞增殖活力示，模型组（0.64±0.06）低于对照组（0.97±0.04），差异具有统计学意义（P<0.05）；CSE处理组（0.37±0.01，0.85±0.03）均低于未处理组（0.64±0.06，0.97±0.04），差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　4.Western blot检测TXNIP蛋白表达显示，模型组（0.33±0.03）高于对照组（0.24±0.04），差异具有统计学意义（P<0.05），CSE处理组（0.57±0.08，0.43±0.05）均高于未处理组（0.33±0.03，0.24±0.04），差异具有统计学意义（P<0.05）；Western blot检测TRX1蛋白表达显示，模型组（0.56±0.05）低于对照组（0.75±0.03），差异具有统计学意义（P<0.05），CSE处理组（0.28±0.02，0.40±0.02）均低于未处理组（0.56±0.05，0.75±0.03），差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　5.直线相关分析显示 TXNIP与 TRX1表达水平呈负相关（r=﹣0.930，P<0.05）。
　　结论：TRX1/TXNIP表达失调可能引起衰老A549细胞氧化/抗氧化失衡，在CSE等促使氧化应激发生的条件下，衰老A549细胞TRX1/TXNIP表达失衡进一步加剧，导致ROS含量增加，从而加剧了氧化损伤。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

主要缩略语

前言

材料与方法

一、主要试剂及来源

二、主要仪器

三.细胞系

四.实验方法

实验结果

1.复制A549细胞衰老模型

2.衰老状态下，CSE对A549细胞内ROS含量的影响

3.衰老状态下，CSE对A549细胞增殖活力的影响

4.衰老状态下，CSE对A549细胞TXNIP、TRX1表达的影响

5.相关性分析

讨论

结论

参考文献

附图

综述:硫氧还蛋白-1与衰老的研究进展

成果目录

致谢