毛兰素联合5-Fu对人胃癌细胞株MGC-803增殖凋亡的影响

摘要

目的：观察毛兰素（Erianin）与5-Fu单药及联合用药对胃癌细胞株MGC-803增殖、凋亡的影响，并探讨两药是否可通过调控Bax、Bcl-2、Caspase-3基因的表达诱导胃癌细胞凋亡,为寻找胃癌新药或优化5-Fu化疗方案提供新的理论依据。
　　方法（：1）以胃癌细胞株MGC-803为研究对象，用不同浓度的Erianin（0.977-250ng/ml）及5-Fu（781.250-200000ng/ml）处理胃癌细胞不同时间（24h，48h，72h），CCK-8法检测吸光值并计算抑制率；（2）分别用五个不同浓度的 Erianin和5-Fu单药及固定比例联合(Erianin0.977ng/ml+5-Fu781.250ng/ml,Erianin3.906ng/ml+5-Fu3125ng/ml,Erianin15.625ng/ml+5-Fu12500ng/ml,Erianin62.500ng/ml+5-Fu50000ng/ml, Erianin250ng/ml+5-Fu200000ng/ml)处理胃癌细胞48h，利用中效原理计算单药组与联合组 IC50浓度及联合用药指数（CI）；（3）根据中效原理计算出联合组IC50浓度为4329.044ng/ml（Erianin5.404ng/ml+5-Fu4323.640ng/ml），用此浓度作为后续所有实验浓度且均处理48h，各实验设单药组（Erianin5.404ng/ml、5-Fu4323.640ng/ml）、联合组（Erianin5.404ng/ml+5-Fu4.324ug/ml）、对照组；（4）流式技术检测细胞周期阻滞情况；（5)AO/EB染色观察细胞凋亡现象；（6）RT-PCR及Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达情况。
　　结果：（1）Erianin及5-Fu单药随药物浓度增大及作用时间延长抑制胃癌细胞增殖作用增强（p＜0.05）。由中效原理计算可知，两药小剂量联合时联合指数（CI）＞1，大剂量联合时联合指数（CI）＜1；（2）流式技术可知Erianin主要阻滞胃癌细胞于G2/M期，5-Fu主要阻滞胃癌细胞于S期，联合用药时被阻滞于S期的细胞较单用5-Fu时少，被阻滞于G2/M期的细胞较单用Erianin时少；（3）AO/EB染色发现，单药组细胞凋亡现象较对照组明显，而联合组细胞凋亡现象又较单药组明显；（4） RT-PCR证实两药均可使胃癌细胞凋亡相关基因 Bax、Bcl-2、Caspase-3的mRNA出现表达，Western Blot进一步证实两药可增加Bax、Caspase-3，减少Bcl-2蛋白的表达，联合用药时增加Bax、Caspase-3，减少Bcl-2蛋白表达的作用较单药组明显（p<0.05）。
　　结论：
　　（1）一定浓度范围内Erianin及5-Fu对胃癌细胞的抑制作用呈时间及浓度依赖性；
　　（2）两药小剂量联合时具有拮抗作用，大剂量联合时具有协同作用；
　　(3）Erianin及5-Fu可通过调控Bax、Bcl-2、Caspase-3因子的表达促进胃癌细胞凋亡。

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主要英文缩略语索引

第1章 前 言

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2实验方法

3实验数据分析

第3章 实验结果

3.1 Erianin及5-Fu单药对胃癌细胞株MGC-803的增殖抑制作用

3.2 Erianin联合5-Fu对胃癌细胞株MGC-803的增殖抑制作用

3.3 Erianin及5-Fu对胃癌细胞周期影响

3.4 Erianin及5-Fu对胃癌细胞凋亡的影响

3.5 Erianin及5-Fu对Bax、BCL-2、Caspase-3三因子mRNA表达的影响

3.6 Erianin及5-Fu对Bax、Bcl-2、Caspase-3三因子蛋白表达的影响

第4章 讨 论

4.1 Erianin及5-Fu单药及联合用药对胃癌细胞株MGC-803增殖抑制的作用

4.2 Erianin及5-Fu对胃癌细胞株MGC-803细胞周期阻滞的作用

4.3 Erianin及5-Fu对胃癌细胞株MGC-803细胞凋亡的影响

4.4 Erianin及5-Fu对胃癌细胞株MGC-803凋亡因子的影响

第5章 结 论

参考文献

文献综述：石斛提取物抗肿瘤作用研究进展

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