17β雌二醇对TGFBI和Periostin蛋白表达的影响及其相互作用

摘要

[目的] Avellino型角膜营养不良家系调查中发现，女性患者视力损伤比男性患者要严重。本研究分析17β雌二醇对人角膜上皮细胞SDHCEC1（Spontaneously derived human corneal epithelial cell line1, SDHCEC1）中TGFBI和Periostin蛋白表达的影响及两者间相互作用关系，探讨TGFBI和Periostin蛋白在Avellino型角膜营养不良中的作用机制。
　　[方法]将不同浓度（10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L）17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1，首先采用western blot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中TGFBI和Periostin的表达情况。其次10-7 mol/L与10-8 mol/L17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1，免疫荧光单标和双标染色（immunocytochemistry，ICC）后，通过激光共聚焦显微镜观察 TGFBI和 Periostin蛋白在细胞中的定位（colocalization）及相互作用。最后应用免疫共沉淀检测在人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin蛋白的相互作用。
　　[结果]1.western blot与qRT-PCR结果显示，不同浓度（10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L）17β雌二醇处理人角膜上皮细胞 SDHCEC1后， TGFBI和Periostin表达呈现浓度依赖性升高（P<0.05）。
　　2.激光共聚焦结果显示，10-7 mol/L与10-8 mol/L17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1后，ICC单标染色角膜上皮细胞中荧光强度随着17β雌二醇浓度升高而增加（P<0.05）；而在双标染色中， TGFBI和Periostin蛋白分布于细胞质中，两者荧光存在明显共定位。
　　3.免疫共沉淀结果显示，anti-TGFBI抗体沉淀TGFBI蛋白时可以检测到Periostin蛋白的存在，TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1中存在相互作用。
　　[结论]1.17β雌二醇呈浓度依赖性促进人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin蛋白表达。
　　2.TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1胞浆内表达，两者存在相互作用。

目录

声明

第1章 绪 论

第2章 材料和方法

2.1材料

2.2 角膜上皮细胞的培养

2.3 雌激素处理人角膜上皮细胞

2.4 蛋白印迹（Western Blot）

2.5 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）

2.6 免疫荧光单标染色

2.7 细胞爬片免疫荧光双标染色

2.8免疫共沉淀实验

2.9 统计学处理

第3章 实验结果

3.1 不同浓度 17β雌二醇对人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin蛋白表达的影响

3.2 不同浓度17β雌二醇对人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin基因表达的影响

3.3 TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1中的共定位情况

3.4 TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1中的相互作用

第4章 讨 论

第5章 结 论

参考文献

文献综述: Avellino型角膜营养不良的研究进展

附录主要英文缩写一览表

硕士在读期间成果

致谢