17β-雌二醇对大鼠脂肪源性干细胞Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

摘要

本文从以下几方面进行论述：
　　第一部分 大鼠ADSCs的分离、培养及多向分化潜能研究
　　目的：
　　研究培养、分离、纯化以及鉴定ADSCs所使用的实验方法，进而使它本身的生物学特点、表面抗原特点等得以明确，同时确定它本身在成骨、成脂肪方面所具有的潜能。这样就可以确定ADSCs本身所具有的定向分化能力，进而为将其应用于细胞治疗POP提供可靠的理论依据。
　　方法：
　　在培养大鼠ADSCs细胞时，主要采用酶消化法。在观察ADSCs细胞结构时，需要借助倒置显微镜来完成。在研究此种细胞的生存特点时，需要使用MTT进行检测，并应用流式细胞计数确定抗原表达水平;借助将ADSCs向成骨、成脂细胞定向诱导分化，进而研究此种细胞的分化水平。
　　结果：
　　通过观察可以发现，体外培养所得到的ADSCs增殖速度较快，其大都为纤维状细胞。细胞形态分布较为均匀，以多角形与长梭形为主。这样在传代的过程中，潜伏期持续时间为一至两天，对数生长期在三至五天，一周后即可进入“s”形生长期。通过第三代细胞流式鉴定后，发现CD29、CD44、CD105表现出阳性，对于CD34、CD45表现出阴性，持其为间充质来源干细胞。ADSCs向成骨细胞诱导28d后茜素红染色阳性;在细胞诱导实验中发现，细胞内存在脂滴。应用油红“O”对其进行染色，发现细胞呈橘红色。
　　结论：
　　ADSCs取材方便，易于分离培养，体外培养增殖稳定，能够向成骨、成脂细胞诱导分化，具有定向分化的能力，能够作为种子细胞治疗PFD.。
　　第二部分 17β-雌二醇对大鼠脂肪源性干细胞增殖及胶原蛋白合成的影响
　　目的：
　　确定应用雌激素后大鼠ADSCs增殖、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达过程以及蛋白合成的影响，这样就可以将雌激素与ADSCs同步使用后进行治疗，从而为POP提供一定的参考。
　　方法：
　　1、在实验设计的过程中，实验组设定了不同浓度的17β-雌二醇（浓度依次为10-7、10-8、10-9、10-10、10-11M。对照组培养基中，不注入17β-雌二醇。所使用的细胞为3代大鼠ADSCs1周。在检测细胞增殖水平时，应用MTT比色法。
　　2.分别使用不同浓度实验组以及对照组所设定的培养基培养第三代大鼠DSCs，时间为七天、十四天、二十一天。应用Western blot技术确定不同类型胶原蛋白量的表达变化情况。
　　结果：
　　1.MTT法检测结果:不同实验组与对照组细胞在生长过程中均呈现出“S”型特点，实验组大鼠在第三代ADSCs后，对细胞增殖起到了一定的促进作用。当实验组浓度为10-9M时，细胞增殖速度达到最大值，与对照组相比，存在生物学意义。
　　2、17β-雌二醇能够使ADSCsⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白表达量增加，与对照组进行比较，具有显著的生物学意义。
　　结论：
　　17β-雌二醇对ADSCs细胞的增殖，合成以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的分泌具有重要的作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

第一部分 大鼠ADSCs的分离、培养及多向分化潜能研究

材料与方法

实验结果

讨论

结论

第二部分 17β-雌二醇对大鼠脂肪源性干细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

材料和方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

在学期间科研成绩

致谢

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