异荭草素对人宫颈癌hela细胞凋亡的影响

摘要

目的：通过体外实验研究不同浓度异荭草素对人宫颈癌hela细胞增殖的影响，并探讨异荭草素对hela细胞内PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控作用。 方法：以人宫颈癌hela细胞株为研究对象，将异荭草素按（20umol/L、40umol/L、80umol/L、160umol/L）浓度分别作用人宫颈癌hela细胞0h、24h、48h，每个浓度梯度均设5个复孔，通过噻唑蓝比色法（MTT法）检测并计算各组的增殖抑制率；通过蛋白印迹法（Western blotting）检测各组细胞内PI3K、Akt、P-Akt及mTOR蛋白表达情况。 结果：MTT法检测结果显示：当异荭草素作用于hela细胞0h时，各组间吸光度值的均数比较无明显差异（P＞0.05）。浓度为20umol/L的异荭草素作用于hela细胞24h时，吸光度值开始下降，且与阴性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；药物作用24h及48h的吸光度值分别与药物作用0h的吸光度值比较有明显差异（P＜0.05）；当异荭草素浓度为20umol/L，药物作用24h与48h的吸光度值比较无明显差异（P＞0.05）；当异荭草素浓度为40、80、160umol/L，药物作用24h与48h的吸光度值比较有明显差异（P＜0.05）。在相同作用时间下，异荭草素浓度在80umol/L以内，吸光度值随药物浓度的增加而减小（P＜0.05），当异荭草素浓度超过80umol/L时，吸光度值较药物浓度为80umol/L时大（P＜0.05）；在同一药物浓度下，随药物作用时间延长，吸光度值减小；当异荭草素浓度为80umol/L，作用时间为48h时，吸光度值最小。根据MTT比色法的原理及吸光度值计算细胞增殖抑制率（%）=（1-实验组OD值/阴性实验对照组OD值）×100%。计算出不同浓度异荭草素作用于hela细胞0h、24h、48h对细胞增殖的抑制率分别为0、0、0、0；14%、25.9%、46.6%、27.7%；23.5%、33.8%、61.1%、31.8%。蛋白印迹法（Western blotting）结果显示：不同浓度异荭草素作用于hela细胞48h后对hela细胞p-Akt蛋白的表达呈抑制作用，而对PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达无明显影响（P＞0.05）。当异荭草素的浓度≤80umol/L时，hela细胞中p-Akt蛋白的表达水平随着药物浓度的增加而下降；当异荭草素的浓度＞80umol/L时，随着药物浓度的增加，hela细胞中p-Akt蛋白的表达水平较异荭草素浓度为80umol/L时有所增加（P＜0.05）。 结论：1.一定浓度范围内（≤80umol/L）的异荭草素对宫颈癌Hela细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖性；超出一定的药物浓度（＞80umol/L）则对宫颈癌Hela细胞的抑制作用相对减弱；2.异荭草素可以下调hela细胞p-Akt蛋白的表达，可能是通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的。

目录

声明

第1章 绪论

第2章 实验材料

2.1 细胞株

2.2 药品

2.3 试剂

2.4 主要仪器

第3章 实验方法

3.1.1 培养液的配制

3.1.2 PBS缓冲液（磷酸缓冲盐溶液）的配制

3.1.3 冻存液的配制

3.1.4 异荭草素母液的配制

3.1.5 MTT溶液的配制

3.1.6Western blotting相关主要试剂的配制

3.2.1 细胞复苏

3.2.2 细胞传代

3.2.3 细胞换液

3.2.4 细胞冻存

3.3 细胞计数

3.4 MTT实验法

3.5.1 蛋白样本制备

3.5.2 制胶

3.5.3 电泳

3.5.4 转膜

3.5.5 封闭

3.5.6 加入一抗

3.5.7 加入二抗

3.5.8 显影

3.5.9 测各蛋白条带的灰度值

3.6 统计学分析

第4章 实验结果

4.1 异荭草素对体外培养的hela细胞增殖的影响

4.2 异荭草素对hela细胞中PI3K、Akt、p-Akt和mTOR蛋白的影响

第5章 讨论

5.1 宫颈癌的发病机制

5.2 异荭草素的药理作用

5.2.1 抗肿瘤作用

5.2.2 抗氧化

5.2.3 降低血糖

5.2.4 抑制炎性疾病

5.2.5 抗病毒

5.3 异荭草素对hela细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响

第6章 结论

参考文献

附录

文献综述:宫颈癌的新辅助化疗进展

作者攻读学位期间的科研成果

致谢