甜蜜素诱导小鼠急性肝损伤模型的建立及甘草酸二铵胶囊的干预

摘要

目的: 1.甜蜜素腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型及急性肝损伤可能发病机制探讨; 2.研究甘草酸二铵肠溶胶囊(Diammonium Glycyrrhizinate Enteric-coated Capsule,DGEC)对甜蜜素导致的小鼠急性肝损伤的干预作用. 方法: 小鼠急性肝损伤模型的建立采用不同剂量甜蜜素腹腔注射法,检测不同时间谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)水平,观察肝脏病理学改变.将实验小鼠分为空白组,模型组,DGEC低、中、高剂量组,易善复阳性对照组.除空白组外各组小鼠予以甜蜜素腹腔注射7天,从第8天起各组以0.9%生理盐水、0.9%生理盐水、不同剂量DGEC及易善复灌胃干预7天.第14天末观察各组如下指标:体重,肝指数;血清ALT,AST,肝组织谷胱甘肽(Glutathione,GSH),谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px),丙二醛(Malondialdehyde,MDA),一氧化氮(Niteic Oxide,NO);肝组织HE染色变化,电镜下肝细胞超微结构;ELISA法检测血清及肝组织肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;免疫组化检测肝组织转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达. 结果: 1.造模组结果:甜蜜素4000mg/kg.d腹腔注射7天可成功造模. 2.实验组结果:(1)与空白组比较,甜蜜素模型组小鼠肝指数、ALT及AST含量、MDA及NO水平明显升高(P＜0.01),GSH及GSH-Px水平明显降低(P＜0.01).与甜蜜素模型组比较,药物干预组的肝指数、ALT及AST水平、MDA及NO水平明显下降(P＜0.05),GSH及GSH-Px水平升高(P＜0.05).药物干预组中DGEC高剂量组效果最明显.(2)空白组肝脏HE染色正常,甜蜜素模型组HE染色可见肝细胞空泡变性及炎性细胞浸润;药物干预各组HE染色较甜蜜素模型组比较均有不同程度的改善.其中DGEC高剂量组改善最明显.(3)电镜检查结果:甜蜜素模型组胞浆中线粒体及内质网明显减少;药物干预各组电镜检查较甜蜜素模型组均有不同程度的改善,但未恢复正常,组间差异不大.(4)ELISA结果:与空白组相比,甜蜜素模型组血清及肝组织TNF-α含量明显升高(P＜0.01).与甜蜜素模型组比较,药物干预各组血清及肝组织TNF-α水平均下降(P＜0.05),DGEC高剂量组效果最显著.(5)免疫组化结果:与空白组相比,甜蜜素模型组TGF-β1的表达增加(P＜0.05).相较于甜蜜素模型组各药物干预组可降低肝组织TGF-β1表达(P＜0.05),组间差异不大. 结论: 1.甜蜜素腹腔注射可以成功建立小鼠急性肝损伤模型,急性肝损伤机制可能与氧化应激反应、TNF-α和TGF-β1介导的炎症反应有关. 2.甘草酸二铵肠溶胶囊对甜蜜素诱导的急性肝损伤小鼠具有治疗作用.

目录

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中、英文词对照表

第一章 前言

第二章 实验材料

2.1实验动物

2.2主要试剂、药品及来源

2.3 主要仪器

2.4 相关试剂的配制

第三章 实验方法

3.1小鼠甜蜜素肝损伤模型的建立实验

3.2.1建立急性肝损伤动物模型

3.2.2处理及给药

3.3.1血清分离

3.3.2组织学标本制备

3.4.1一般情况观察

3.4.2检测指标及方法

3.5统计学处理

第四章 实验结果

4.1甜蜜素诱导建立急性肝损伤模型实验结果

4.1.1各组肝功能变化

4.1.2各组小鼠肝脏病理检查

4.2.1小鼠一般情况观察比较

4.2.2小鼠体重及肝指数比较

4.2.3 小鼠血液ALT、AST比较

4.2.4各组小鼠肝脏病理检查

4.2.5小鼠肝细胞超微结构电镜结果

4.2.6小鼠肝组织GSH、GSH-Px含量比较

4.2.7小鼠肝组织MDA、NO含量比较

4.2.8 ELISA法检测小鼠血清及肝组织 TNF-α 的含量

4.2.9 免疫组化法检测小鼠肝组织 TGF-β1的含量

第五章 讨 论

1. 关于甜蜜素急性肝损伤动物模型的建立

2.甜蜜素所致急性肝损伤发病机制的探讨

3.药物性和毒物性肝损伤的治疗

4.DGEC对甜蜜素所致肝损伤小鼠的治疗作用

4.1保护肝细胞功能

4.2对甜蜜素所致肝损伤小鼠TNF-α影响

4.3 对甜蜜素所致肝损伤小鼠TGF-β1影响

第六章 结论

参考文献

综述:药物性肝损伤分子机制及TNF-α作用研究进展

致谢