长期压力刺激通过CRFR1促进伏隔核内DA信号调节异常导致食物成瘾的研究

摘要

目的：观察长期彩光压力刺激能否促进食物成瘾的发生，探索其相关机制。 方法：第一部分实验中，根据是否给予高脂食物和彩光压力刺激，将32只C57小鼠分为对照组、高脂食物组、彩光压力刺激组、彩光刺激和高脂食物联合诱导组，分别于夜周期第6-8小时给予相应处理，连续诱导1个月。1个月后分别检测各组小鼠摄食行为、焦虑样行为、体重，依据上述指标对各组食物成瘾评分进行评估。各组小鼠处死后利用qPCR的方法检测各组伏隔核内CRFR1受体、多巴胺D1受体、多巴胺D2受体mRNA表达。第二部分实验中，将30只C57小鼠分为过表达组、干扰组、对照组，根据分组向各组小鼠伏隔核内立体定向注射AAV-CRFR1、AAV-ShCRFR1、AAV-NC病毒载体，同第一部分实验方法诱导一个月。一个月后测量各组摄食行为、焦虑抑郁样行为、体重，各组处死后利用qPCR的方法检测各组伏隔核内CRFR1受体、多巴胺D1受体、多巴胺D2受体mRNA表达。 结果：第一部分实验中，各组在不同实验条件下诱导一个月后，高脂组、联合诱导组小鼠较对照组2小时摄食量、24小时摄食量逐渐增加，且禁食后摄食量明显增加。联合诱导组强迫进食量明显高于对照组和高脂组。彩光组、联合诱导组小鼠焦虑样行为中矿场中央区滞留时间明显下降，联合诱导组组小鼠高架十字开放臂滞留时间、黑白箱穿梭实验中白箱滞留时间较对照组明显下降。联合诱导组组食物成瘾评分指数和体重增长率明显高于对照组和高脂组。qPCR结果提示联合诱导组组小鼠伏隔核Dopr2和CRFR1表达明显增加。第二部分实验中，摄食行为测试中发现，伏隔核过表达CRFR1后，过表达组小鼠2小时摄食量、24小时摄食量逐渐增加，对高脂食物的摄食动机增加，焦虑样行为中中矿场央区滞留时间、黑白箱穿梭实验白箱滞留时间、开放臂滞留时间均下降；过表达组小鼠食物成瘾评分增加，而体重增长增加。而敲除CRFR1后，干扰组小鼠摄食量下降，对高脂食物的摄食动机下降，禁食后摄食量下降，强迫摄食量下降，食物成瘾评分降低，体重降低。qPCR结果发现过表达后多巴胺D2受体表达增加，而敲除后多巴胺D2受体表达下降，多巴胺D1受体无明显影响 结论：长期压力刺激可促进食物成瘾，其机制可能与伏隔核内CRFR1和Dopr2表达增加有关。

目录

声明

第1章 绪论

1.1压力刺激是食物成瘾形成的重要因素

1.2压力刺激诱发食物成瘾可能与CRFR1介导的伏隔核多巴胺信号调节异常相关

1.3 伏隔核CRFR1有望成为食物成瘾相关肥胖的治疗靶点

1.4 本章小结

第2章 实验材料和实验方法

2.1、实验材料和设备

2.2 实验试剂

2.2．实验动物

2.3．实验方法

2.3.1 食物成瘾的诱导

2.3.2病毒载体的构建及鉴定

2.3.3 过表达或敲除模型的建立

2.3.4摄食行为测试

2.3.5.焦虑抑郁样行为测试

2.3.6 食物成瘾评分

2.3.7 脑组织取材

2.3.8 病毒注射靶点确认

2.3.9 qPCR检测模型小鼠脑组织内多巴胺、CRF信号通路mRNA表达

2.3.10 统计学方法

第3章 实验结果

3.1行为学测试：彩光刺激促进食物成瘾的发生

3.1.1 压力刺激可增加对高脂食物的摄食量

3.1.2 压力刺激促进暴饮暴食行为的发生

3.1.3 压力刺激促进强迫进食行为的发生

3.1.4 彩光刺激加重焦虑样行为

3.1.6 彩光刺激促进食物成瘾

3.1.7 体重

3.2、qPCR结果:彩光刺激促进食物成瘾的机制可能与伏隔核内CRFR1和多巴胺受体系统的mRNA异常表达相关

3.3、选择性过表达或者敲除伏隔核内的CRFR1受体对食物成瘾行为的影响

3.3.1、过表达载体鉴定结果

3.3.2、干扰RNA载体鉴定结果

3.4 敲除或过表达伏隔核CRFR1对食物成瘾样行为的影响

3.4.1 敲除CRFR1受体可降低基础摄食量

3.4.2 过表达加重暴饮暴食，而敲除CRFR1受体可改善暴饮暴食行为

3.4.3敲除CRFR1受体可改善强迫摄食行为

3.4.4敲除CRFR1受体可改善焦虑样行为

3.4.5敲除CRFR1受体可改善焦虑样行为

3.4.6过表达CRFR1促进食物成瘾，而敲除CRFR1表达改善食物成瘾

3.4.7过表达CRFR1加重食物成瘾，增加体重增长率，而敲除CRFR1改善食物成瘾，降低体重增长率

3.5、伏隔核内CRFR1表达对多巴胺受体系统的mRNA表达的影响

第4章 讨论

第5章 论文结论

综述:伏隔核在参与食物成瘾发生机制的研究进展

参考文献

致谢