大豆凝集素在不同种属动物小肠中吸收特点的比较研究

摘要

本试验选取五种动物(猪、羊、狗、兔和鸡)为试验对象，分别代表杂食动物、反刍动物、肉食动物、啮齿动物和禽类。各种动物均为雄性，生理年龄均在1/2性成熟期，采用体内原位结扎灌注肠段的方法研究了不同浓度大豆凝集素(SBA)在不同种属动物小肠中的残留、吸附和吸收特点，及其对组织学形态的影响。 试验所需大豆凝集素为自制的纯化制品，将SBA配置成不同浓度的Krebs液，采用体内原位结扎方法灌注动物小肠，均取空肠前段，各种动物以空肠前段1/3处相对位置结扎(从空肠开始处算起：猪，130cm；羊，130cm；狗，40cm；鸡，10cm；兔，30cm)，每种动物四头(只)，每只动物分别结扎四段，每段长5cm，凝集素设四个浓度梯度：0.0mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL和3.0mg/mL，每个梯度四个重复。根据各种动物肠段表面积的不同，灌注液的体积也不同：猪、羊、狗：5ml；兔、鸡：2mL。灌注时间8h，试验结束后，采用间接抑制ELISA方法检测三个测量指标：灌注液中剩余SBA量，肠黏膜表面吸附的SBA量，吸收进入小肠壁的SBA量，再根据各段总灌注SBA量，计算出残留率，肠吸附率，肠吸收率。 试验结果表明：在残留率、肠吸附率和肠吸收率这三个指标分析中，每种动物不同浓度条件下各指标之间均差异显著，灌注相同浓度SBA时，不同动物各指标间存在显著差异。各种动物的SBA残留率均随着浓度的升高而逐渐增多，在3mg/mL 时残留率显著增大。各种动物均是在3mg/mL 时吸附强度最大，兔、鸡和羊在1mg/mL 时吸收强度最大，3mg/mL 时略小于1mg/mL 时。各种动物除了兔在1mg/mL时吸收能力最大之外，其余均是在0.5mg/mL时吸收能力最大。猪和狗在1mg/mL 时吸附能力最大，其余则是在0.5mg/mL时吸附能力最大。这说明了在低浓度时，动物小肠对SBA的敏感性较强，其吸附能力与吸收能力较大。在三个SBA浓度中，羊的残留率都是最大的，吸收率是最小的，且吸附率也较小，兔的吸收率最大，残留率较小，吸附率也很小，表明兔小肠对SBA通透性较好，吸收能力较强。鸡与兔的趋势基本一致，但鸡在3mg/mL时残留率与吸附率较大，表明其对SBA的通透性不如兔。猪和狗在各浓度中的吸附率都是最大的，说明SBA与其小肠黏膜吸附能力较大。从SBA浓度方面讲，低浓度对小肠的作用较大，各种动物都是在低浓度(0.5mg/mL，1mg/mL)时的吸附效果和吸收效果最明显，当SBA浓度达到1mg/mL 时，兔、鸡和羊的小肠吸收强度已达最大，到3mg/mL时已有所减少，而猪和狗在3mg/mL 时虽能继续吸收，但比较1mg/mL时增加的幅度很小。组织学观察结果表明：不同浓度的SBA对不同种属动物空肠的作用效果不是很明显，这可能与实验时间较短有关系。但还是可以看出各种动物在添加了不同浓度的SBA后，绒毛长度有所降低，腺窝深度增加，只是各个动物变化的浓度不一样，这可能由于各种动物小肠对SBA的耐受性不同导致。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

1凝集素的定义和分类

1.1定义

1.2分类

2植物凝集素的研究概况

2.1植物凝集素的结构与性质

2.2植物凝集素的生物学功能

2.3植物凝集素的抗营养作用

3大豆凝集素

3.1大豆凝集素的定义和理化性质

3.2大豆凝集素的抗营养作用

3.3大豆凝集素的研究现状

材料与方法

1大豆凝集素的分离纯化及纯度与活性的检测

1.1大豆凝集素的分离纯化

1.2纯化凝集素的产率测定

1.3纯度鉴定

1.4活性检测

2体内原位结扎灌注肠段法研究不同剂量大豆凝集素在不同种属动物小肠中的吸收特点

2.1试验动物

2.2材料与仪器

2.3原位结扎灌注肠段的操作方法

2.4检测指标：

3竞争性间接抑制ELISA方法检测待测样品中SBA含量

3.1材料与仪器

3.2各种溶液配制

3.3抗体IgG纯化

3.4竞争性间接抑制ELISA方法

4组织学观察

4.1石蜡切片的制备(苏木伊-伊红对染法)

4.2切片照相及观测值测定

5数据统计

结果与分析

1大豆凝集素的分离纯化结果

1.1大豆凝集素的提纯曲线

1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定SBA纯度

1.3纯化后SBA产率及活性检测

2竞争性间接抑制ELISA检测结果

2.1竞争性间接抑制ELISA检测方法标准曲线

2.2不同种属动物在不同浓度SBA条件下的吸收情况

3不同浓度SBA对不同种属动物空肠组织学形态的影响

3.1绒毛长度、腺窝深度及绒毛/腺窝值

3.2小肠组织学切片

讨论

1大豆凝集素的分离纯化效果

2间接抑制ELISA方法检测大豆凝集素

3不同浓度SBA在不同种属动物小肠中吸收特点的比较研究

本试验的创新点及不足之处

结论

参考文献

附录

致谢

作者简介