碱金属离子对生物碱HPLC-MS分析影响的研究

摘要

生物碱类化合物的分析研究一直是备受国内外研究者关注的一个领域，这主要是因为生物碱不仅具有化学结构多样性和生物来源多样性，更重要的是其具有生物活性多样性。然而，由于生物碱结构中的碱性氮原子与色谱柱固定相表面残留硅羟基的相互作用，当采用HPLC分析生物碱时，往往会出现不对称峰、峰拖尾、色谱峰展宽等现象，从而不能进行有效的分离。为了改善生物碱的色谱峰形，研究工作者主要从减少固定相表面的残留硅羟基和向流动相中添加改性剂这两个方面进行研究。本论文从流动相添加剂着手，以原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱为模型化合物，首次系统的考察了碱金属离子作流动相添加剂时，目标化合物在C18柱上的分离分析，同时考察了在这些流动相改性剂条件下，四种生物碱ESI质谱电喷雾过程中的离子化效率。另外，将硝酸铯做流动相改性剂应用于八种合成药物以及马钱子中生物碱的测定。本文主要做了以下工作：
　　 1.以原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱四种生物碱为模型化合物，系统的考察了常规流动相添加剂、碱金属离子、不同价态的金属离子、不同种类的铯盐、以及不同浓度的硝酸铯做流动相改性剂时，四种生物碱在SpherigelC18柱上分离参数的影响。同时考察了部分流动相条件下，生物碱在UltimateXB-C18柱上的分析，并与SpherigelC18柱上分离参数进行对比。结果表明，硝酸铯做流动相改性剂可以选择性的屏蔽色谱柱固定相表面残留的活性硅羟基，从而优化生物碱的色谱分离。本实验为生物碱的HPLC分析提供了一种新的方法，也为固定相表面残留硅羟基的表征提供了一个新的平台。
　　 2.以原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱四种生物碱为模型化合物，系统的考察了不同流动相添加剂、不同浓度的硝酸铯、以及不同种类的铯盐做流动相改性剂条件下，四种生物碱在waters2695-ZQ2000和岛津LC-MS2020两台不同仪器上的ESI离子化效率。实验结果表明，碱金属离子的加入，对目标化合物的离子化过程存在一定的抑制作用，并随着碱金属离子浓度的减小而减小。在两台仪器上，碱金属离子对目标化合物离子化效率的影响不一致，这也说明在用MS进行定量分析时，通常需要采用内标法来扣除仪器本身的影响。但是两者都存在一个共同点，即碱金属离子的加入，屏蔽了硅羟基，改善了色谱分离。
　　 3.将硝酸铯做流动相添加剂应用于马钱子(NuxVomica)中马钱子碱和士的宁的测定，成功的将马钱子中两种生物碱有效的分离，解决了HPLC分析马钱子碱和士的宁时出现的峰展宽和峰拖尾情形。同时为了验证硝酸铯做流动相添加剂的实用性，将其应用于八种合成药物(包括四种有机酸和四种碱性化合物)的测定，并成功的将八种物质进行有效分离。