冠心病患者外周血内皮祖细胞的CXCR4表达及趋化能力变化的研究

摘要

目的:观察冠心病不稳定型心绞痛患者外周血内皮祖细胞趋化性及CXCR4表达的变化。用瑞舒伐他汀及Ox-LDL体外干预脐血来源内皮祖细胞(EPCs),探讨瑞舒伐他汀对正常及损伤EPCs的数量、粘附性、趋化性的影响。并进一步研究瑞舒伐他汀对冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs的功能以及CXCR4表达的影响。
　　 方法:选取冠心病组及冠脉造影正常的对照组各5例,比较其外周血EPCs趋化性,并通过QRT-PCR检测CXCR4mRNA表达。不同浓度瑞舒伐他汀(0.001umol/L、0.01umol/L、0.1 umol/L、1.0umol/L、10umol/L、100umol/L)干预脐血来源EPCs,设立对照组,观察加入瑞舒伐他汀后EPCs数量、粘附性、趋化性的变化。不同浓度瑞舒伐他汀及损伤因子Ox-LDL50ug/ml共同干预脐血EPCs,观察EPCs数量、粘附、趋化性的变化,筛选出最佳浓度瑞舒伐他汀。用最佳浓度（10umol/L）瑞舒伐他汀干预冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs,设立对照组,计数贴壁细胞数,并检测EPCs的功能,同时用QRT-PCR检测CXCR4mRNA表达。观察瑞舒伐他汀干预后冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs的功能及CXCR4表达的变化。
　　 结果:
　　 1、冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs的趋化性较对照组明显下降(P＜0.001),QRT-PCR检测冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs的CXCR4表达较对照组也明显下降(P＜0.05)。
　　 2、不同浓度瑞舒伐他汀干预培养脐血EPCs:瑞舒伐他汀增加EPCs的数量,在0.001umol/L至100umol/L范围内呈剂量依耐性,以100umol/L组最多。不同瑞舒伐他汀剂量组EPCs的粘附、趋化能力比较,以10umol/L组粘附、趋化性最强,差异有统计学意义(P＜0.05),100umol/L组较10umol/L组粘附、趋化性反而下降,差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3、不同浓度瑞舒伐他汀与Ox-LDL共同干预脐血EPCs:结果显示以100umol/L瑞舒伐他汀干预后贴壁细胞数最多,随着瑞舒伐他汀浓度的递减,贴壁细胞数逐渐减少。以10umol/L瑞舒伐他汀干预后EPCs的粘附、趋化能力最强。
　　 4、瑞舒伐他汀干预培养冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs:以10umol/L瑞舒伐他汀干预培养冠心病不稳定型心绞痛患者外周血EPCs后其数量、粘附性、趋化性均增强,且CXCR4表达增强。
　　 结论:
　　 1、冠心病不稳定型心绞痛患者外周血内皮祖细胞趋化性及CXCR4表达明显下降;
　　 2、瑞舒伐他汀使脐血内皮祖细胞数量增加,趋化、粘附性增强;
　　 3、瑞舒伐他汀能有效改善OX-LDL损伤的脐血内皮祖细胞的功能,使其数量增加,趋化、粘附性增强;
　　 4、瑞舒伐他汀使冠心病不稳定型心绞痛患者外周血内皮祖细胞数量增加,粘附性、趋化性增强,CXCR4表达增强。

目录

摘要

第一章 引言

第二章 材料和方法

2．1 材料

2．1．1 主要试剂与药品

2．1．2 主要实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 试剂的分装及配制

2．2．2 HFN包被培养板

2．2．3 脐血的分离培养

2．2．4 细胞形态的观察

2．2．5 荧光显微镜观察细胞的双荧光染色

2．2．6 流式细胞术检测

2．2．7 冠心病患者外周血EPCs趋化性及CXCR4表达的变化

2．2．8 瑞舒伐他汀干预脐血EPCs

2．2．9 瑞舒伐他汀与Ox-LDL干预脐血EPCs

2．2．10 瑞舒伐他汀干预冠心病患者外周血EPCs

2．3 统计学分析

第三章 结果

3．1 内皮祖细胞的分离培养与鉴定

3．1．1 单个核细胞分离

3．1．2 内皮祖细胞形态

3．2 内皮祖细胞的鉴定

3．2．1 双荧光染色鉴定

3．2．2 流式细胞术鉴定

3．3 外周血EPCs趋化性及CXCR4表达情况

3．3．1 一般资料

3．3．2 冠心病患者外周血EPCs趋化性变化

3．3．3 QRT-PCR检测冠心病患者外周血EPCsCXCR4mRNA表达

3．4 瑞舒伐他汀干预脐血EPCs

3．4．1 EPCs数量改变

3．4．2 粘附实验

3．4．3 趋化实验

3．5 瑞舒伐他汀与Ox-LDL共同干预脐血EPCs

3．5．1 EPCs数量改变

3．5．2 粘附实验

3．5．3 趋化实验

3．6 瑞舒伐他汀干预冠心病外周血EPCs

3．6．1 EPCs数量的变化

3．6．2 粘附实验

3．6．3 Transwell实验

3．6．4 QRT-PCR检测两组EPCs CXCR4mRNA的表达

第四章 讨论

4．1 内皮祖细胞的分离培养和鉴定

4．2 冠心病患者外周血内皮祖细胞的变化

4．3 瑞舒伐他汀对内皮祖细胞数量及功能的影响

4．4 瑞舒伐他汀对冠心病患者外周血内皮祖细胞的影响

4．5 前景与展望

第五章 结论

参考文献

综述

英文缩写词表

在读期间发表的主要学术论文及参与课题

致谢

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