氘代银杏黄酮苷元的合成及其在敞开式质谱定量分析中的应用

摘要

银杏叶提取物（ginkgo biloba extract，GBE）是银杏的干燥叶提取物，它有两种主要的活性成分:萜内酯类化合物和黄酮类化合物。标准化GBE最早由德国科学家提出，把黄酮醇苷含量之24％，内酯含量≥6％，作为GBE的质量控制指标，这也是国内外制药行业现行的GBE质量控制指标。银杏黄酮类化合物多以糖苷的形式存在，其水解以后苷元以槲皮素、山奈酚、异鼠李素为主，Hasler等将三种苷元作为检测和监控银杏总黄酮的质量控制指标。
　　黄酮类化合物传统定量方法是高效液相色谱法（HighPerformance Liquid Chromatography，HPLC），虽然HPLC灵敏度高，定量准确，但是流动相需要消耗大量的有机试剂，且前处理过程复杂，耗时较长，从经济和环保的角度分析，HPLC方法不适用于大批样品的快速定量分析。
　　敞开式质谱纸喷雾离子化技术作为一种新型的质谱离子化技术不仅分析速度快（10s内）、高通量、无须复杂前处理甚至不需要前处理过程，且测定结果准确可靠。本文将合成三种氘代苷元，作为同位素内标，将其应用到敞开式质谱纸喷雾技术(paper spray massspectrometry，PS-MS)定量分析研究中，建立一种对GBE中总黄酮快速准确的定量方法。本文的主要内容如下:
　　(1)氘代槲皮素的合成与表:以水热合成法和均相反应条件为基础，对影响合成结果的条件如催化剂、反应温度、反应时间等进行了优化。结果在温度为160℃，以氯化1-丁基-3-甲基咪唑（离子液）作为助溶剂，35％DCl为酸催化剂，D2O为氘代溶剂，反应4h就可以获得负离子模式下的主峰306(d5)的产物，原物质占的比例小于1％;另外在CH3OD纯溶剂中，温度140℃，4h合成了303(d2)的主峰。
　　(2)氘代山奈酚和异鼠李素的合成与表征:以水热合成与均相反应条件为基础。氘代山奈酚合成反应中，对反应温度、时间等条件进行了优化，结果在温度140℃，反应时间为4h，在CH3OD纯溶剂中反应得到正离子模式下289(d2)的主峰，选择性好，产率98％;以山奈酚-d2为原料，加入离子液，35％DCl，D2O，反应温度170℃，时间4h，得到山奈酚291(d4)的产物。在反应温度为140℃，时间4h，在CH3OD中异鼠李素反应得到了二氘代产物。
　　(3)以三种苷元二氘代产物作为混合内标物，应用到PS-MS对GBE水解后三种苷元进行定量分析中，与传统的HPLC定量结果比较，结果HPLC得到的银杏总黄酮含量为29.80％，PS-MS测得结果为28.01％，两者结果相近，说明建立的PS-MS定量方法准确。

目录

摘要

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 黄酮类化合物的概述

1．2．1 黄酮类化合物的简介

1．2．2 黄酮类化合物的生物活性

1．3 黄酮类化合物的分析方法

1．3．3 薄层色谱扫描法

1．3．4 超临界流体色谱法(SFC)

1．4 敞开式质谱技术的发展

1．4．1 解吸附电喷雾离子化技术

1．4．2 直接实时分析离子化

1．4．3 解吸附电晕束离子化

1．4．4 介质阻挡放电离子源

1．5 纸喷雾离子化技术

1．6 PS-MS定量分析的现状

1．6．1 半定量分析

1．6．2 精确定量分析

1．7 氘代内标的合成

1．7．1 H／D交换机理

1．7．2 多相催化

1．7．3 均相催化

1．8 论文选题意义和主要内容

第二章 氘代槲皮素的合成与表征

2．2 实验部分

2．2．3 标准溶液的制备

2．2．4 合成方法

2．3 结果与讨论

2．3．1 实验条件的优化

2．3．2 核磁共振表征结果

2．4 小结

第三章 氘代山奈酚和异鼠李素的合成与表征

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器与试剂

3．2．2 实验条件

3．2．3 标准溶液的制备

3．2．4 合成方法

3．3 结果与讨论

3．3．1 山奈酚氘氢交换实验条件的优化

3．3．2 山奈酚核磁共振氢谱表征

3．3．3 异鼠李素氘氢交换实验条件优化

3．4 小结

第四章 敞开式质谱对银杏叶提取物的定量(对比HPLC)

4．1 前言

4．2 实验部分

4．2．1 仪器与试剂

4．2．2 实验条件

4．2．3 标准溶液的制备

4．2．4 样品的处理

4．3 结果与讨论

4．3．1 高效液相色谱定量

4．3．2 敞开式质谱定量

4．3．3 实际样品检测

4．4 小结

结语

参考文献

致谢

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