无滋养层无血清体系下人胚胎干细胞定向诱导分化视网膜色素上皮细胞

摘要

视网膜色素上皮细胞（Retinal pigmented epithelium, RPE）的功能紊乱、变性和凋亡可造成视网膜内环境的恶化，进而引起光感细胞的凋亡，最终导致退行性视网膜疾病的发生，使患者视力下降，甚至失明。但迄今为止，依然没有有效的治疗手段来治愈这些疾病。而近期临床试验表明，细胞治疗有望成为该类退行性视网膜疾病的治疗方法。其中，人胚胎干细胞（Human embryonic stem cell, hESCs）是一类能无限增殖和分化成所有三胚层细胞的细胞群体，而hESCs诱导分化获得的RPE（hESCs-RPE）被认为是细胞移植治疗的最佳种子细胞。并且动物模型实验和临床试验结果显示，hESCs-RPE在体内具有很好的安全性，不存在致瘤和引起其它不良反应的风险，并且对视力的恢复具有一定的效果。但是，现有的hESCs-RPE培养体系，往往使用滋养层（feeder）和含有胎牛血清（Fetal calf serum, FBS）等动物源性或成分不明确成份。为hESCs-RPE的临床应用带来了污染的潜在风险和高昂的培养成本。而建立无动物源性培养体系，将有利于人们对RPE生长机制的研究和今后对hESCs-RPE相关细胞制剂的规模化、商品化生产。
　　本文通过无滋养层feeder、无血清体系培养的hESCs。并利用免疫荧光染色，核型分析，流式细胞仪等技术手段检测 hESCs的形态与多能性表达情况。hESCs经过7天的培养后，克隆块基本融合。此时，将原有的hESCs培养液更换为RPE分化培养液，利用自分化方法进行RPE诱导分化。再经过纯化、传代之后获得较纯的RPE样细胞。之后，我们利用免疫荧光染色、RT-PCR、扫描电子显微成像、核型分析等技术对hESCs分化获得的RPE细胞进行形态特征鉴定。并利用细胞吞噬实验检测hESCs-RPE是否具有吞噬功能。该无动物源性体系符合临床要求，为后续实验提供了“种子”细胞。利用无feeder无血清体系下自分化获得的hESCs-RPE，可为国内hESCs-RPE相关临床研究提供参考。

目录

声明

第1章 文献综述

1.1 AMD的介绍

1.2 SCs分化获得RPE的研究现状

1.3 SCs治疗AMD的临床研究进展

1.4 讨论与展望

1.5 本文构想

第2章 无feeder无血清体系下人胚胎干细胞的体外培养与分化前鉴定

2.1 前言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

第3章 无feeder无血清体系下hESCs来源RPE定向诱导分化

3.1 前言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 讨论

结论

参考文献

致谢

附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录

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