胡颓子叶总黄酮的提取分离及平喘活性研究

摘要

近年来，自然环境已成为世界性问题，特别是随着空气质量的下降，呼吸系统疾病如慢性支气管炎、支气管哮喘、慢性咳嗽等已经成为威胁人类健康的常见疾病。其中，慢性支气管炎和支气管哮喘作为呼吸系统的典型疾病，因其病情顽固、慢性难愈，严重影响患者的健康状态及日常生活质量，故研究与开发有效的治疗药物具有十分重要的意义。
　　胡颓子叶作为一种习用药材，药用历史悠久，具有平喘、敛肺、止咳等功效，临床上用于治疗哮喘、慢性喘息性气管炎。为了挖掘胡颓子叶这一药用资源，明确其组分与药效之间的关系，本课题从胡颓子叶化学成分群出发，对其黄酮类成分群进行提取分离，并开展活性作用机制研究。
　　第一，建立胡颓子叶黄酮类化合物的含量测定方法。研究报道胡颓子叶中黄酮类化合物多且复杂，不可能一一测量其单体化合物的含量，因此本文建立了UV-Vis法测定胡颓子叶总黄酮的含量以及酸水解-HPLC法测定胡颓子叶中3种黄酮苷元的含量，这两种方法均简便可靠，重复性好，准确度高，可作为胡颓子叶中黄酮类成分的含量测定方法。
　　第二，优化胡颓子叶黄酮类成分的提取工艺。在单因素实验的基础上，采用正交实验法对胡颓子叶黄酮类成分的提取工艺进行优化。结果确定最优的提取条件为：料液比1：30，乙醇浓度70％，提取次数3次。在此条件下，胡颓子叶总黄酮苷元得率为0.243%，经验证该工艺条件稳定可靠。
　　第三，柱层析法分离纯化胡颓子叶总黄酮。选取在黄酮类化合物纯化过程中5种较为理想的树脂填料（聚酰胺、HP-20、HPD-600、NKA-2、D-101），通过静态吸附解吸实验从中筛选出适合分离总黄酮的最优树脂填料，结果聚酰胺及HP-20富集纯化胡颓子叶总黄酮的效果最佳。但动态洗脱实验显示，单独使用两种树脂填料总黄酮的含量达不到理想效果（95%以上），故联合使用两种树脂填料。结果表明纯化纯度有所提高，总黄酮的含量达到了85%左右。为了达到预期的目标，接着采用中压柱层析法，用ODS填料进一步分离纯化，结果表明总黄酮的含量达到了96.68%。
　　第四，胡颓子叶黄酮类成分群对小鼠气管平滑肌的作用及机制。采用小鼠离体气管平滑肌实验，在组织水平上探讨胡颓子叶黄酮类成分群对气管平滑肌的舒缩作用。结果表明，胡颓子叶黄酮能够舒张高钾引起的小鼠气管平滑肌收缩，并且舒张作用表现为浓度依赖性。进一步采用膜片钳技术，在细胞水平离子通道层面上探讨其作用机制。结果表明，胡颓子叶总黄酮能够阻断电压依赖性 L型钙通道电流（VDCCS）。研究可得出结论，胡颓子叶黄酮类成分群能舒张小鼠气管平滑肌，该作用与阻断L型钙通道有关。

目录

声明

第1章 绪 论

1.1 胡颓子叶简介

1.2 黄酮类化合物的研究

1.3 支气管哮喘简介

1.4 本课题研究的目的及意义

第2章 胡颓子叶黄酮类化合物的含量测定方法建立

2.1 引言

2.2 仪器与材料

2.3 方法与结果

2.4 讨论与小结

第3章 胡颓子叶黄酮类化合物的提取工艺研究

3.1 引言

3.2 仪器与材料

3.3 方法与结果

3.4 讨论与小结

第4章 柱层析法分离纯化胡颓子叶总黄酮的研究

4.1 引言

4.2 仪器与材料

4.3 方法与结果

4.4 讨论

第5章 胡颓子叶总黄酮对小鼠离体气管平滑肌的作用及机制研究

5.1 前言

5.2 仪器与材料

5.3 实验动物

5.4 溶液配制

5.5 实验方法

5.6 实验结果

5.7 实验讨论

参考文献

致谢

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