九香虫对紫芝发酵生产紫芝多糖和紫芝三萜的影响研究

摘要

本论文主要研究药用真菌紫芝的深层发酵工艺，探讨虫类药物九香虫对紫芝发酵生产抗癌活性物质紫芝多糖和三萜类物质的影响，运用正交设计对紫芝－九香虫发酵生产胞内多糖和胞外三萜类物质进行优化，采用MTT法对所得产物的体外抗肿瘤活性进行了研究。研究结果如下： 1、适宜紫芝液体发酵的粮食型培养基为：米糠6g/L，玉米粉20g/L，黄豆粉12g/L，蔗糖20g/L。此培养基培养的紫芝生物量可达15.12g/L。 2、在紫芝培养基中添加适量的九香虫，对紫芝的生长影响不大，但能显著提高紫芝的胞内多糖和胞外三萜类物质的产量。在紫芝培养基中添加5％的九香虫，紫芝胞内多糖的产量显著提高，由原来的75.17mg/g菌体提高到105.01mg/g菌体；胞外多糖也有所提高，由原来的24.58mg/100mL提高到28.09mg/100mL。胞外三萜类物质的含量由原来的132.6mg/L提高到157.1mg/L。但当九香虫的添加量增大到8％时，菌体生长明显受到抑制，多糖和三萜类物质的产量也明显低于对照。 3、九香虫提高紫芝活性物质产量的有效成分的研究表明，九香虫促进紫芝胞内多糖合成的有效成分主要是九香虫水提取物；提高胞外三萜类物质的产量的有效成分主要是九香虫乙醇提取物；促进胞外多糖分泌的有效成分主要是九香虫乙醚提取物。 4、紫芝活性成分的发酵优化，即九香虫添加量、添加时间和总培养时间的优化结果表明，以胞内多糖产量为指标时最佳添加量为5％，添加时间为发酵起始1天后加入，培养时间为6天，胞内多糖产量可达109.28mg/g，比优化前的105.01mg/g提高了4.27mg/g；以胞外三萜类物质产量为指标的添加量为5.5％，添加时间为发酵起始1天后加入，总培养时间为7.5天，胞外三萜类物质产量为159.8mg/L，比优化前的157.1mg/L提高了2.7mg/L。 5、紫芝三萜类物质的体外抗肿瘤实验表明，在300μg/mL剂量下，紫芝-九香虫发酵组对人肠癌细胞SW620的抑制率为46.01％，紫芝单独发酵组的抑制率为45.89％；在100μg/mL剂量下，紫芝-九香虫发酵组的抑制率为36.76％，紫芝单独发酵组的抑制率为36.84％。两组样品对人正常肝细胞株L-02的抑制作用都不显著。

目录

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摘要

1绪论

1.1灵芝发酵及其抗癌活性成分的研究现状

1.1.1灵芝概述

1.1.2紫芝的生物学特性

1.1.3紫芝的化学成分

1.1.4灵芝发酵的国内外研究现状

1.1.5灵芝抗癌活性成分的研究进展

1.2昆虫体内的抗肿瘤功能因子

1.2.1抗菌肽

1.2.2干扰素

1.2.3性诱激素

1.2.4虫草素

1.2.5甾体物质

1.2.6维生素

1.2.7甲壳素和壳聚糖

1.2.8斑蝥素

1.2.9不饱和脂肪酸

1.3九香虫的研究概况

1.3.1九香虫的形态及生物学特性

1.3.2九香虫的化学成分

1.4本文选题目的意义和主要研究内容

1.4.1选题目的与意义

1.4.2主要研究内容

2以粮食为主的紫芝发酵培养基的优化

2.1材料和方法

2.1.1菌种

2.1.2主要试剂和材料

2.1.3液体菌种制备

2.1.4供试碳源

2.1.5供试氮源

2.1.6菌体生物量的测定

2.1.7培养基的正交设计

2.1.8主要仪器

2.2结果与分析

2.2.1不同碳源对紫芝菌丝生物量的影响

2.2.2不同氮源对紫芝菌丝生物量的影响

2.2.3培养基正交实验

2.2.4正交实验的验证试验

2.3结论与讨论

3九香虫对紫芝活性物质产量的影响

3.1材料和方法

3.1.1菌种

3.1.2虫药

3.1.3主要材料和试剂

3.1.4菌体生物量的测定

3.1.5胞内多糖的测定

3.1.6胞外多糖的测定

3.1.7胞内三萜类物质的测定

3.1.8胞外三萜类物质的测定

3.1.9菌种培养方法

3.1.10九香虫对紫芝液体发酵动力学的影响

3.1.11主要仪器

3.2结果与分析

3.2.1不同添加量对紫芝生物量的影响

3.2.2不同添加量对紫芝胞内和胞外多糖的影响

3.2.3不同添加量对紫芝胞内和胞外三萜类物质的影响

3.2.4九香虫对紫芝液体发酵过程的影响

3.3结论与讨论

4九香虫提高紫芝活性物质产量的有效成分的研究

4.1材料与方法

4.1.1主要材料

4.1.2九香虫不同提取物的制备

4.1.3菌种培养方法

4.1.4生物量、胞内外多糖、三萜类物质的测定

4.1.5主要仪器

4.2结果与分析

4.2.1九香虫三种提取物对紫芝生物量的影响

4.2.2九香虫三种提取物对紫芝胞内多糖的影响

4.1.3九香虫三种提取物对紫芝胞外多糖的影响

4.1.4九香虫三种提取物对紫芝胞内外三萜类物质的影响

4.3结论与讨论

5紫芝活性成分的发酵优化

5.1材料与方法

5.1.1主要试剂和材料

5.1.2菌种培养

5.1.3以胞内多糖产量为指标的发酵优化

5.1.4以胞外三萜产量为指标的发酵优化

5.1.5主要仪器

5.2结果与分析

5.2.1以胞内多糖产量为指标的发酵优化

5.2.2以胞外三萜产量为指标的发酵优化

5.3结论与讨论

6紫芝胞外三萜类物质体外抗癌活性的研究

6.1材料和方法

6.1.1细胞株

6.1.2主要试剂

6.1.3样品处理

6.1.4完全培养液的配制

6.1.5样品对肿瘤细胞的生长抑制试验——四唑盐(MTT)比色法

6.1.6数据分析

6.1.7实验仪器、器材

6.2结果与分析

6.3结论与讨论

结论

参考文献

附录A

附录B 攻读学位期间发表的论文

致谢