锌/JAZF1调控TR4在DEHP致青春期大鼠精子发生障碍中作用

摘要

目的：
　　本研究以邻苯二甲酸二乙基己基酯(Di-2-ethylhexyl phthalate，DEHP)为受试物，以青春期雄性大鼠为研究对象，研究DEHP的生殖毒性以及锌/JAZF1调控TR4在DEHP致精子发生障碍中的作用及部分机制。
　　方法：
　　1、将32只健康40日龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组，分别为溶剂对照（玉米油）组和250、500、1000 mg/kg DEHP染毒组，每组8只。采用灌胃方式进行染毒，染毒容量为10 ml/kg，每天1次，连续染毒4周。
　　2、大鼠处死后收集标本，采用组织学方法分析各组睾丸组织支持细胞、各级生精细胞、间质细胞的数量和形态改变;TUNEL染色法检测睾丸细胞凋亡指数;采用CASA精子分析系统分析记录精子活力的运动参数;采用紫外分光光度计法检测睾丸匀浆液中SOD、MDA和GSH-Px的含量变化;采用火焰原子吸收分光光度法检测睾丸组织中锌含量;提取睾丸组织总RNA，用Real-TimePCR检测基因JA ZF1、TR4的mRNA表达。
　　结果：
　　1、体重变化和脏器系数
　　随着染毒时间延长，1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠体重降低(P＜0.05);染毒可不同程度导致大鼠睾丸重量及脏器系数明显下降（睾丸萎缩）、肝脏系数增加（肝肿大）、肾脏系数减少（肾萎缩）。
　　2、精子活力
　　与对照组比较，1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠的精子密度、直线运动的精子密度均降低;250 mg/kg DEHP染毒组A级精子比例、平均直线运动速度、平均路径速度、平均鞭打频率、运动的直线性、直线运动精子活率、精子运动的向前性均降低;250、1000 mg/kg DEHP染毒组直线运动的精子个数均较低;250、500 mg/kg DEHP染毒组活动精子密度升高，差异均有统计学意义(P＜0.05);而各剂量DEHP染毒组B、C级精子比例和平均曲线运动速度、平均路径速度、平均侧摆幅度、运动的摆动性、平均移动角度均无明显改变。
　　3、睾丸组织病理形态
　　光镜下观察HE染色可见DEHP染毒组可以不同程度的引起睾丸曲精小管、生精细胞、支持细胞的改变受损。
　　4、睾丸组织细胞凋亡指数
　　随着染毒剂量逐渐增加，各染毒组睾丸组织细胞凋亡指数均升高(P＜0.05);光镜下观察TUNEL染色阳性的异常凋亡细胞以精原细胞和精母细胞为主，伴有少量的支持细胞。
　　5、睾丸组织氧化应激
　　与对照组(0 mg/kg)相比较，各个染毒组SOD活力下降(P＜0.05);各个染毒组MDA含量升高(P＜0.05);250 mg/kg剂量组GSH-Px活力下降(P＜0.05)。
　　6、睾丸组织锌含量和JAZF1、TR4的mRNA表达水平
　　(1)与对照组(0 mg/kg)相比较，1000mg/kg剂量染毒组睾丸组织中锌的含量降低(P＜0.05)。(2)与对照组(0 mg/kg)相比较，1000mg/kg剂量组JAZF1mRNA表达水平升高(P＜0.05);1000mg/kg剂量组TR4 mRNA表达水平下降(P＜0.05)。
　　结论：
　　1、DEHP可导致青春期大鼠睾丸萎缩，形态学结果破坏，诱发氧化应激。
　　2、DEHP可诱导致青春期大鼠睾丸细胞凋亡。
　　3、睾丸内锌含量以及JAZF1、TR4基因的的转录水平可能与DEHP致精子发生的障碍有关。JAZF1调控TR4可能参与DEHP诱导的精子发生障碍。

目录

声明

摘要

英文缩写对照表

第1章 前言

2．1．1 主要仪器

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要试剂的配置

2．2 实验对象

2．3 研究方法与步骤

2．3．1 动物模型建立

2．3．2 生物样本采集

2．3．3 大鼠体重及脏器系数的测定

2．3．4 精子活力的测定

2．3．5 睾丸组织病理形态的观察及凋亡指数的测定

2．3．6 睾丸组织中SOD、GSH-Px酶的活性和MDA含量的测定

2．3．7 荧光定量PCR法检测JAZF1、TR4的mRNA表达水平

2．4 数据分析

3．1 大鼠体重

3．2 大鼠睾丸组织重量和脏器系数

3．3 大鼠精子活力变化

3．4 睾丸组织病理学改变

3．5 大鼠睾丸细胞凋亡

3．6 DEHP对青春期大鼠睾丸组织氧化应激的影响

3．8 锌／JAZF1调控TR4在DEHP致精子发生障碍中的相关基因mRNA表达水平

第4章 讨论

4．1 DEHP致大鼠体重和脏器系数的变化

4．2 DEHP致大鼠精子活力降低和睾丸组织病理形态改变

4．3 DEHP通过氧化应激诱导大鼠睾丸组织细胞凋亡

4．4 DEHP致睾丸组织锌含量下降和通过锌／JAZF1调控TR4致生精功能障碍

4．5 总结与展望

参考文献

第5章 综述 孤核受体TR4的研究进展

致谢

附录1 攻读硕士学位期间发表的论文

附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目