P120ctn及相关蛋白在宫颈癌组织和细胞系中的表达及生物学意义

摘要

目的：检测P120ctn及相关的E-cad、β-cat和Ki67蛋白在宫颈癌组织中的表达与分布，分析P120ctn及相关蛋白的表达与宫颈癌分化程度、增殖程度、FIGO临床分期和淋巴结转移的关系。在此基础上，检测宫颈癌细胞系中P120ctn及相关蛋白的表达，分析细胞系与组织的表达是否一致，探讨P120ctn异常表达是否涉及到P120ctn的磷酸化修饰，并进一步检测宫颈癌细胞系中P120ctn及E-cad mRNA的表达，证实P120ctn及相关蛋白异常表达在宫颈癌发生发展中的作用，为宫颈癌的诊断及治疗提供新的靶点，为进一步研究肿瘤发展转移的内在机制奠定理论基础。 方法: 1)免疫组织化学SP法检测宫颈鳞癌组织中P120ctn、β-cat、E-cad及Ki67蛋白的表达、分布。2)免疫细胞化学检测宫颈腺癌(Hela)、鳞癌(Caski)细胞系中P120ctn、β-cat、E-cad及Ki67蛋白的表达、分布。3)蛋白质印迹实验(western-blot)检测Hela、Caski细胞系中P120ctn与磷酸化P120ctn的表达。4)RT-PCR及实时荧光定量PCR检测Hela、Caski细胞系中P120ctn、E-cad mRNA的表达。 结果: 1)正常宫颈组织中P120ctn、β-cat、E-cad表达在胞膜，胞浆少见。宫颈鳞癌组织中P120ctn及E-cad胞膜表达降低，出现胞浆表达，异常表达率分别为 78.8％(41/52)，73.1％(38/52)；β-cat除了胞浆表达以外，还伴随胞核表达，异常表达率为75.0％(39/52)；与正常宫颈组织相比差异都有显著性。 2)P120ctn、β-cat、E-cad的异常表达与癌细胞分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)，与年龄、临床分期无关(P>0.05)。3)正常宫颈组织中Ki67蛋白不表达或表达较少，阳性表达率为15.4％ (4/26)，宫颈鳞癌组织中Ki67蛋白出现阳性表达，阳性表达率为 76.9％(40/52)，差异有显著性；Ki67蛋白阳性表达与临床分期有关(P<0.05)，与年龄、癌细胞分化程度及淋巴结转移无关(P>0.05)；P120ctn异常表达与Ki67蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。 4)正常脐静脉内皮细胞系(HECV)中，P120ctn及β-cat大部分表达在胞膜，E-cad胞膜和胞浆表达量都少，Ki67阴性表达；Hela、Caski细胞系中，P120ctn及β-cat胞膜表达减少，胞浆表达增加，E-cad胞膜表达丢失，有少量胞浆表达，Ki67蛋白阳性表达。5)HECV、Hela与Caski细胞系中都有P120ctn与磷酸化P120ctn的表达； P120ctn在HECV细胞中的表达量高于Hela及Caski细胞(P<0.05)，Hela与Caski细胞之间没有表达量差异(P>0.05)；磷酸化P120ctn在HECV细胞中表达量低于Hela及Caski细胞(P<0.05)，Hela细胞低于Caski细胞(P<0.05)。6)HECV、Hela与Caski细胞系中都有P120ctn与E-cad mRNA的表达，P120ctn在Hela、Caski中的表达量分别为HECV的74.32％、78.34％，E-cad在Hela、Caski中的表达量分别为HECV的25.85％、29.84％。 结论： 1) P120ctn及相关蛋白E-cad、β-cat的异常表达参与了宫颈癌的恶性转化过程，与肿瘤的分化、浸润、转移有关，三者异常变化可作为宫颈癌变的参考依据。 2)P120ctn的异常表达与Ki67蛋白阳性表达呈正相关，提示P120ctn的异常表达不仅与癌细胞的侵袭转移有关，还可能启动了与细胞增殖有关的异常信号转导通路，细胞增殖程度越快，癌细胞浸润深度越深，播散范围越广。3)宫颈癌细胞系中P120ctn的异常表达涉及到P120ctn的磷酸化修饰，磷酸化促使P120ctn与钙粘蛋白-连环蛋白复合体(cadherin catenin complex， CCC)分离，发生异常表达。4)转录水平上，宫颈癌细胞中P120ctn及E-cad的转录水平低于正常内皮细胞，提示P120ctn及E-cad在癌细胞中除了位移的改变还有量的减少，损坏了CCC的正常结构，影响了相关蛋白的正常表达及分布。