复方参菇七蟾(QHF复方)颗粒的制备及其抗肿瘤的药效学研究

摘要

目的：本课题是在课题组前期大量研究的基础上，为了更好的将QHF复方用于临床抗肿瘤方向，对QHF复方进行剂型优化，制成参菇七蟾颗粒剂，并完成质量控制。同时用体外实验与体内实验相结合的方式来进行参菇七蟾颗粒抗肿瘤的药效学评价。
　　方法：（1）药剂学部分：取干蟾皮，通过水提醇沉法来提取、分离纯化，得到华蟾素；三七用大孔吸附树脂法分离纯化，得到三七总皂苷；高效液相法（HPLC）鉴定华蟾素、三七总皂苷；按QHF复方配比，加入香菇多糖，人参皂苷Rg3，制成参菇七蟾颗粒剂，并完成鉴定与相关质量控制。（2）药效学部分：1）MTT法检测参菇七蟾颗粒对人胃癌细胞SGC7901、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞HepG2增殖的影响。2）对H22腋下瘤的作用研究：KM小鼠40只，每只右侧腋窝皮下接种瘤细胞液0.2ml。接种后随机分为4组：参菇七蟾颗粒（S）组、原复方（QHF）组、顺铂（DDP）组、模型（M）组。接种第二天开始给药，末次给药次日，颈椎脱臼处死小鼠取肿瘤，计算抑瘤率；取小鼠胸腺、脾脏，计算胸腺、脾指数；采用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量；Western blot检测小鼠肿瘤组织中P53、CD31、Bax-bcl2、HGF-cMet的表达；免疫组化检查小鼠肿瘤组织中ERK-pERK的表达。3）对H22腹水瘤的作用研究：KM小鼠40只，每只腹腔接种瘤液0.2ml。随机分为4组：S组、QHF组、DDP组、M组。接种第二天开始给药，观察小鼠的死亡情况并记录，计算每组小鼠的平均生存时间和生命延长率。
　　结果：（1）完成了参菇七蟾颗粒制备、鉴定剂质量控制。（2）1）参菇七蟾颗粒对人胃癌细胞SGC7901、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞HepG2增殖的影响：参菇七蟾颗粒对三种肿瘤细胞有明显的抑制作用，且具有时间依耐性，与原复方比较，虽存在差异，但基本不具有统计学意义。2）对H22腋下瘤的作用研究：DDP、S、QHF组的抑瘤率分别为56.67％、36.05%、42.00%；与M组相比，S、QHF组血清中的IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量均升高（P＜0.01）；与M组相比，S组Bax的表达明显上调（P<0.01）， bcl2的表达明显下调（P<0.01）；与M组相比，S组，QHF组、DDP组HGF的表达均有明显降低（P<0.01）；与M组相比，DDP组、S组、QHF组，均能明显下调肿瘤组织中P53的表达（P<0.01）；与M组相比，S组小鼠肿瘤组织中CD31的表达明显降低（P<0.01）。3）对H22腹水瘤的作用研究：与M组相比，用药组的平均生存时间均有明显的延长（P<0.01）；S组、QHF组的生存时间比DDP组长（P<0.05）；而S组与QHF组之间，虽有差异，但不具有统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：（1）完成参菇七蟾颗粒剂有效成分的提取分离纯化及鉴定，按颗粒剂的制备工艺制成参菇七蟾颗粒，并进行了相关质量控制。（2）体外实验说明参菇七蟾颗粒可以同时对多种不同的肿瘤产生效果。体内实验说明参菇七蟾颗粒主要是从提高机体的免疫功能，促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成，抑制肿瘤细胞浸润、转移，延长生存时间等方面来发挥抗肿瘤作用。

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引言

第一部分 参菇七蟾颗粒的制备及质量控制

材料与方法

1.1材料

1.2实验方法

结果

1.1复方参菇七蟾颗粒中有效成分的鉴定

1.2复方参菇七蟾颗粒的制备、鉴定及质量控制

第二部分 参菇七蟾颗粒抗肿瘤的药效学研究

材料与方法

2.1材料

2.2实验方法

结果

2.1 参菇七蟾颗粒对人胃癌细胞 SGC7901、人乳腺癌细胞 MCF-7、人肝癌细胞HepG2增殖的影响

2.2参菇七蟾颗粒对H22腋下瘤小鼠的作用研究

2.3参菇七蟾颗粒对H22腹水瘤小鼠生存时间的作用研究

讨论

1药剂学部分

2 药效学部分

小结

参考文献

综述:华蟾素抗恶性肿瘤的机制及不良反应的研究

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著