超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡对宫颈癌协同抑制作用的体内外实验研究

摘要

目的：
　　通过自制超声微泡同时包载紫杉醇和miR-34a，并检测微泡的一般性质，通过体内外实验，评价超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡作用于宫颈癌的协同抑制效果。
　　方法：
　　（1）采用改良双乳剂挥发法和低温真空干燥技术，自制载紫杉醇及miR-34a微泡，通过扫描电镜观察微泡形态，粒径分布仪检测微泡粒径大小和分布，紫外分光光度计分析药物浓度计算载药量和包封率。
　　（2）超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡作用于U14宫颈癌细胞，Western Blotting检测U14细胞中Bcl-2和CDK6蛋白的表达情况。
　　（3）建立U14宫颈癌皮下移植瘤模型，并进行随机分组，分为：空白对照组、空微泡+超声组、miR-34a微泡+超声组、紫杉醇微泡+超声组、紫杉醇联合miR-34a微泡+超声组。每三天进行一次相应的处理，根据肿瘤体积绘制肿瘤生长曲线，在实验结束时处死小鼠，计算各组体积和质量抑瘤率，肿瘤组织行病理组织学检查，免疫组织化学法检测各组肿瘤组织微血管密度（MVD）的表达情况，Western blotting检测各组肿瘤组织Bax、Bcl-2和CDK6蛋白的表达水平。
　　结果：
　　（1）载紫杉醇及miR-34a微泡电镜下呈圆形，表面光滑，粒径分布仪检测平均粒径为1.76μm，紫外分光光度计分析药物浓度，紫杉醇的载药量为11.86％，包封率为89.68%，miR-34a的包封率为33.11%。
　　（2）超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡作用于U14宫颈癌细胞，与对照组相比，U14细胞中Bcl-2和CDK6蛋白表达均下调。
　　（3）超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡作用于U14宫颈癌皮下移植瘤，与对照组相比，紫杉醇联合miR-34a微泡组生存状态最好，肿瘤生长明显减慢，肿瘤体积和质量明显下降（P<0.01），其体积和质量抑瘤率分别为78.57%、87.97%，明显高于其它各组（P<0.01）；HE染色观察，用药的四组肿瘤组织呈现不同程度变性坏死，紫杉醇联合miR-34a微泡组表现最为明显，癌细胞数目减少，并可见大量核固缩和核碎屑以及大片无组织红染区；免疫组织化学法显示用药的四组肿瘤组织MVD表达不同程度减少，以紫杉醇联合miR-34a微泡组减少最为明显（P<0.01）；Western blotting结果显示，与对照组相比，用药的四组肿瘤组织Bax的表达上调，Bcl-2和CDK6的表达下调，以紫杉醇联合miR-34a微泡组表现最为明显（P<0.01）。
　　结论：
　　超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡可以抑制宫颈癌细胞的生长，诱导凋亡，阻断靶基因的表达，在体内外实验中均表现出良好的协同抑制作用。为超声介导宫颈癌的化疗联合基因治疗提供了理论依据，也为宫颈癌的临床治疗提供了新思路。

目录

声明

英文缩略词表

引言

材料与方法

1.1 实验相关仪器及材料

1.1.1主要仪器及设备

1.1.2药品及试剂

1.1.3实验动物及细胞

1.1.4主要溶液试剂配制

1.2 实验方法

1.2.1载紫杉醇及miR-34a微泡的制备及一般性质检测

1.2.2超声介导载紫杉醇及 miR-34a 微泡对U14 宫颈癌细胞作用的体外实验初探

1.2.3超声介导载紫杉醇及 miR-34a 微泡对U14 宫颈癌皮下移植瘤作用的体内实验研究

1.2.4统计学方法

结果

第一部分 载紫杉醇及miR-34a微泡形态及一般性质

1.1 载紫杉醇及miR-34a微泡的形态

1.2 载紫杉醇及miR-34a微泡的粒径分布情况

1.3 载紫杉醇及miR-34a微泡的载药量及包封率

第二部分 超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡对U14宫颈癌细胞的作用

2.1 Bcl-2和CDK6在U14宫颈癌细胞中的表达

第三部分 超声介导载紫杉醇及miR-34a微泡对U14宫颈癌皮下移植瘤的协同抑制作用

3.1 肿瘤生长情况

3.2 肿瘤组织HE染色观察

3.3 肿瘤组织MVD表达

3.4 肿瘤组织Bax、Bcl-2和CDK6蛋白表达

讨论

结论

参考文献

综述:超声微泡介导基因治疗妇科肿瘤的应用研究

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著