僵蚕抗凝活性成分的提取与纯化

摘要

我们对传统中药僵蚕的研究发现其粗提液在体内外有很强的抗凝血作用.实验结果表明,它不仅对凝血酶原时间(PT),白陶土部分凝血活酶时间(APTF)具有延长作用,而且对凝血酶时间(TT)也有显著延长作用,表明是直接抑制凝血酶-纤维蛋白原反应物<'[1]>.为了提取和分离纯化僵蚕抗凝活性蛋白成分,阐明僵蚕抗凝的化学本质,该文首先对僵蚕粗提物的提取次数,提取时间,溶媒用量及浸泡时间进行考察,以紫外分光光度法测定其抗凝蛋白含量,用L<,9>(3<'4>)正交设计得出最佳提取工艺为:僵蚕用8倍量水煎煮2次,每次30分钟.然后将僵蚕粗提液用凝胶色谱和离子交换色谱进行分离纯化,结果显示:凝胶色谱分离得到4个色谱峰,其中峰3活性与其它组分相比有显著差异(P<0.01),活性组分进一步用阴离子色谱交换梯度洗脱,得到3个色谱峰,其中峰1活性与其它组分相比有显著差异(P<0.01),将其脱盐后再用阳离子色谱分离得到单一活性组分.对阳离子色谱分离的抗凝活性多肽进行纯度和结构鉴定表明:聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一条带,经质谱测定其分子量为1.2Kda,反相高效液相色谱分离一抗凝活性主峰,用其测定一级结构(含甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、丙苯氨酸和酪氨酸等7种氨基酸),这远远小于已有的抗凝血药物水蛭素(约7Kda),这很利于以后我们合成这个小分子多肽的工作.

目录

文摘

英文文摘

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引言

实验研究

实验材料和仪器

实验方法和结果

1.僵蚕粗提液的预实验

2僵蚕提取工艺研究

3目的物的分离纯化

4目的物的鉴定

讨论

1测定指标的选择

2聚丙烯酰胺凝胶电泳与质谱方法的讨论

3实验中的问题

结语

参考文献

致谢

文献综述