植物胚胎发生调控基因LEC1的克隆及其对水稻的遗传转化

摘要

本研究设计特异引物，分别从拟南芥cDNA和水稻总DNA中通过PCR扩增，得到特异片段，克隆到载体pMD18-T，以M13+/-为引物测序，GenBank中比对，获得了LEC1基因。　　本文介绍了导入拟南芥LEC1基因的不育系获得胚乳发育缺陷的种子。将胚乳缺陷的种子于无激素的1/2MS培养基中培养，其中有一株发芽，长成外观正常的植株，另一株则只长出根。提取其DNA，以上述的引物进行检测，为阳性转基因个体。　　本文不经授粉，转基因不育系得到具有萌发能力的种子，说明LEC1基因在单子叶的农作物水稻中能促进胚胎发生。有望通过LEC1基因在水稻中的人工调控表达的基因工程方法实现水稻的无融合生殖，从而实现杂种优势固定的梦想。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词

独创性声明和关于论文使用授权的说明

第一章绪论

1植物胚胎发生基因调控的研究进展

1.1原胚期——极性建成

1.2球形胚-心形胚过渡期——区域形态建成

1.3器官形成与成熟期——分生组织形成及发育

1.4小结

2 LEC1的研究

3花粉管通道转基因技术

3.1转化机理的研究和探讨

3.2小结

4研究内容与目的

第二章实验材料与试剂

1材料

1.1植物材料

1.2菌种和载体

2主要试剂

2.1酶类

2.2试剂

2.3试剂盒

2.4 PCR引物

2.5培养基

2.6抗生素

第三章研究方法

1植物胚胎发生调控基因的克隆

1.1拟南芥LEC1基因的克隆

1.2水稻LEC1基因的克隆

2植物表达载体的构建

2.1克隆载体上目的基因的释放

2.2 pWM101载体片段制备

2.3表达载体构建

2.4表达载体的检测

3植物胚胎发生调控基因LEC1对水稻的遗传转化

3.1花粉管通道法转化水稻

3.2潮霉素抗性预实验

3.3转基因水稻的分析

第四章实验结果与分析

1植物胚胎发生调控基因的克隆

1.1拟南芥LEC1基因的克隆

1.2水稻LEC1基因的克隆

1.3小结

2植物表达载体的构建

2.1 LEC1片段的释放

2.2 pWM101载体片段制备

2.3连接转化

2.4表达载体的检测

3植物胚胎发生调控基因LEC1对水稻的遗传转化

3.1花粉管通道法转化水稻

3.2潮霉素抗性预实验

3.3转基因水稻的分析

3.4小结

第五章分析与讨论

1无融合生殖的研究与应用

2转基因植株的筛选

3转基因植株后代遗传性状的分析

参考文献

附 录

附录A拟南芥LEC1序列

附录B拟南芥LEC1测序结果

附录C拟南芥LEC1测序结果与NCBI中序列的比对

附录D水稻LEC1基因

附录E水稻LEC1测序结果

附录F水稻LEC1测序结果与NCBI中序列的比对

附录G水稻LEC1测序结果与拟南芥LEC1测序结果在NCBI中比对

致谢