精子载体法制作转基因试管猪胚胎的研究

摘要

本研究共分为4部分对猪体外受精技术和精子转染技术展开了研究，以期建立一个高效的以猪精子为载体的基因转移技术平台，为转基因猪乳腺生物反应器的研制奠定基础。 第一部分针对影响猪体外受精的几个常见因素设立五个实验：即对在成熟培养液中添加不同量(0﹪，10﹪，20﹪，30﹪)的猪卵泡液(PFF)；不同的成熟培养液成分和卵母细胞的体外成熟培养温度；不同的卵母细胞体外成熟培养方法(微滴法与平皿法)以及卵母细胞的不同采集方法(剖解法，抽吸法，机械破碎法)对猪体外受精效果的影响进行了一定的研究。 第二部分重点探讨了性成熟对猪卵母细胞体外成熟及体外受精效果的影响。结果表明：(1)性成熟前卵母细胞在成熟率方面与成熟后差异不大，但是在分裂率上要低于性成熟后。(2)适当延长性成熟前卵母细胞的体外成熟培养时间，在一定程度上能提高其分裂率，但对其成熟率无显著影响。(3)性成熟后卵母细胞延长体外成熟时间后其分裂率较44h略有下降。(4)性成熟前卵母细胞作成熟培养时，适当提高FSH和LH浓度有助于提高成熟率。 第三部分探讨了外源DNA转染猪精子的影响因素，精子结合及内化转运外源DNA的作用机制。结果表明：猪精子具有自发性结合外源DNA能力。精子与外源DNA孵育的时间和PH值在一定程度上影响孵育后精子的活率。 第四部分通过荧光显微镜与PCR从不同时期胚胎中检测出携带外源DNA的阳性胚，说明精子与外源DNA共孵育能使精子携带外源DNA，并通过体外受精技术使外源DNA进入早期胚胎。精子的转染效率受外源DNA的浓度和精浆的影响。精浆的抑制作用可通过反复离心洗涤得以解除；如果精子不进行去精浆处理，其结合外源DNA的能力将下降。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

前言

第一章不同卵母细胞采集方法与培养条件对猪体外受精的影响研究

第二章性成熟前猪卵母细胞对体外受精的影响

第三章猪精子转染外源DNA的研究

第四章以精子为载体的转基因试管猪胚胎研究

结论

参考文献

英文缩写一览表

致谢

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