Babesia gibsoni AMA-1基因的克隆和表达及其血清学诊断上的研究

摘要

本文通过B.gibsoni感染狗血清对由B.gibsoni裂殖子构建的cDNA基因表达文库进行免疫筛选，其中获得的27个阳性克隆是编码同一蛋白的cDNA。经过核苷酸序列分析，发现这些cDNA不完整，缺乏5′端的基因。于是，采用PCR方法从cDNA文库扩增含5′端的cDNA。获得完整的基因序列后，通过计算机分析，显示，整个基因长度是2，108bp，其中包括一个长度为1，764bp的开放阅读框架，编码分子量约为62kDa大小的一条多肽链。通过BLAST，提交至GenBank数据库进行比较，显示这条多肽链与已报道的AMA-1有同源性，特别是与BabesiabovisAMA-1(BbAMA-1)同源性高达53﹪，我们因此把这条多肽命名为BabesiagibsoniAMA-1(BgAMA-1)。为了进一步研究BgAMA-1，构建了BgAMA-1基因的重组表达质粒，并在大肠杆菌BL21中以GST-BgAMA-1融合蛋白形式进行表达，结果显示：GST蛋白(空白对照)和重组融合蛋白GST-BgAMA-1的大小与预期的相符，分别为26kDa和88kDa。Westernblot分析表明，重组抗原BgAMA-1能特异性吸附B.gibsoni感染犬血清中的某种抗体，呈现特有的反应带，而相应的对照组GST无特异性反应出现。初步推断，BgAMA-1为B.gibsoni所特有的抗原。以重组蛋白BgAMA-1作为诊断抗原的ELISA试验中，能区分B.gibsoni感染犬血清和SPF犬血清，且与其他Babesia属没有出现交叉反应现象；另外，系列血清ELISA检测试验中，能从感染后的第10天起检测到抗体反应，且感染后的207天仍有较强的抗体反应；说明作为B.gibsoni的诊断抗原，在血清学诊断方面具有特异性强，灵敏度高的优点。本研究，还进行了IFAT试验，利用抗重组抗原BgAMA-1抗体检测虫体自身分泌的AMA-1抗原，结果表明，抗BgAMA-1抗体能特异性识别虫体本身AMA-1抗原，说明重组BgAMA-1保持了与自然AMA-1相同的免疫原性。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、分析与讨论

五、小结

参考文献:

致谢

附录:实验室所用试剂及配制

作者简历