转OsSec27p和OsARHI基因烟草分子鉴定和不同铁处理的生理指标检测

摘要

OsSec27p、OsARHI是在水稻缺铁胁迫下上调表达基因中与膜泡运输有关的两个基因。本实验室前期对OsSec27p、OsARHI这两个基因进行了分析比对，并获得了这两个基因的全长cDNA；构建了植物表达载体pCAMBIA1302-Sec27p、pCAMBIA1302-ARHI，并将其转到烟草中，获得了OsSec27p、OsARHI的转基因烟草T0和T1代种子。 本论文针对实验室前期的实验成果，对转基因T1代烟草分别在分子水平和生理水平进行分析和鉴定。从三个层次进行分子水平测定，即抗性筛选、基因水平的PCR检测、转录水平的RT-PCR检测和蛋白水平的GFP检测。生理水平上测定观察了形态变化、测定了pH值和植物中的铁含量。 实验结果表明：转基因烟草中确实转入了目的基因片段，并且在植株生长过程中转入的目的基因片段多数没有被剔除；经过使用GFP绿色荧光检测仪对植株进行检测后发现，缺铁胁迫下转基因烟草的叶片GFP表达量相对较高，从而证明在缺铁处理的转基因烟草中转入的目的基因表达量较高；将转基因烟草的叶片和根进行铁含量检测，数据的显示表明在转入OsARHI和OsSec27p两个基因后，烟草对于缺铁胁迫的耐受性得到了一定的增强，根系吸收铁离子更为有效，植物体内输送铁离子的能力有了增强。通过对烟草生长进行观察、统计及研究，发现缺铁胁迫的烟草侧根的数目明显增多，而且植物叶片的黄化现象有明显的改善；而由水培烟草的培养液pH值的变化，可以推测转基因烟草根系会分泌出一些酸性物质，改变培养液的酸碱度，以影响对周围环境铁离子的吸收效率从而适应植物的缺铁胁迫。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：名词缩写

声明

第一部分 前言

1植物的缺铁胁迫及相关蛋白和基因的研究进展

2转基因植物诊断的研究进展

3本实验的研究背景、技术路线

第二部分 实验材料与方法

1实验材料

2实验方法

2.1转基因烟草的基因水平鉴定

2.2转基因烟草的转录水平鉴定

2.3转基因烟草的蛋白水平检测-绿色荧光蛋白GFP的测定

2.4原子吸收分光光度法测定转基因烟草中铁含量

2.5转基因烟草的缺铁培养

2.6转基因烟草营养液pH值的测定

第三部分 结果与分析

1转基因烟草的抗性筛选

2转基因烟草的基因水平检测

3转基因烟草的转录水平鉴定

4转基因烟草的蛋白水平检测-绿色荧光蛋白GFP表达测定

5转基因烟草中总铁含量分析

6转基因烟草缺铁胁迫下的形态分析

7转基因烟草培养液pH值的测定

8讨论

第四部分 小结与展望

1小结

2展望

参考文献

致谢

作者简介

附录