猪骨形成蛋白15基因编码区序列的克隆、测序及多态性研究

摘要

骨形成蛋白15(bone morphogenetic protein-15,BMP15)是由卵母细胞分泌的一种生长因子.BMP15基因在卵母细胞中惟一表达,对早期卵泡生长和分化以及排卵起重要的调节作用.该文的主要研究目标是基于比较基因组学方法和PCR技术,获得猪BMP15基因的编码区序列(coding sequence,CDS),并建立适宜的多态性检测方法.选择大白猪和梅山猪作为试验材料,根据人、小鼠和猪的BMP15基因设计并合成4对引物,进行基因组DNA的PCR扩增、克隆、测序,用BLAST软件进行DNA序列排列.对BMP15基因的克隆、测序及多态性研究有助于我们更深地了解该基因的真正功能,另外对猪育种及提高产仔数也有重要意义.

目录

摘要

ABSTRCT

第一部分文献综述

1前言

2猪高繁殖力的生理学研究进展

2.1排卵数（ovulation number)

2.2胚胎存活率(embryonic survival rate)

2.3子宫容积(uterine capacity)

2.4胎盘效率(placental efficiency)

2.5激素水平(hormone level)

3控制产仔数的候选基因或QTLs

3.1雌激素受体基因(Estrogen Receptor ,ESR)

3.2促卵泡激素β(follicale-stimulating hormone-B,FSHB)亚基基因

3.3骨桥蛋白(Osteopontin ,OPN)位点

3.4视黄酸受体g(retinoicacid receptor-gamma,RARG)和视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein4,RBP4)

3.5催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因

3.6猪产仔数的QTLs

4骨形成蛋白15的研究现状

4.1骨形成蛋白的研究概况

4.2骨形成蛋白15基因研究现状

第二部分研究目的和意义

第三部分材料与方法

1实验材料

1.1菌株和克隆载体

1.2实验动物血样

1.3酶与引物

1.4主要仪器和设备

1.5试剂和溶液

2实验方法

2.1猪血DNA的提取

2.2基因组DNA的浓度测定与质量检测

2.3猪BMP15基因的克隆、测序及多态性研究

2.4 PCR产物的纯化

2.5纯化后PCR产物的克隆

2.7质粒DNA的小规模抽提

第四部分结果与分析

1猪BMP15基因编码区序列的扩增、克隆及测序

2 BMP15基因的SNP检测方法的建立

2.1 BMP15基因SNP多态性

2.2 BMP15基因SNP多态性PCR-RFLP检测技术的建立

3 BMP15位点在不同群体中的基因型频率和等位基因频率

4 BMP15基因PCR-RFLP多态性与产仔数、产活仔数性状的相关性分析

第五部分讨论与结论

1比较基因组学

2影响酶切的因素

3 PCR产物的克隆

3.1 CaCl2法制备感受态细胞

3.2连接

4 SNP突变研究

5 BMP15基因遗传效应分析

5.1BMP15基因单碱基突变的研究

5.2BMP15基因的遗传效应分析

6测序结果序列分析

7结论

8进一步的工作

参考文献

致谢

附 录

附录1 发表文章及获得的序列

附录2 大白猪BMP15基因exon1、exon2在GenBank中登录情况

附录3 梅山猪BMP15基因exon1、exon2在GenBank中的登录情况

附录4 大白BMP15基因的编码区序列及其在GenBank中的登录情况

附录5 梅山猪BMP15基因编码区序列及其在GenBank中的登录情况

附录6 大白猪和梅山猪BMP15基因编码区序列比较