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1文献综述
1.1环境的渗透压对酵母生存的影响
1.2甘油在酵母菌适应高渗环境过程中发挥的作用
1.3高渗胁迫下酵母增加胞内甘油积累的方式
1.3.1通过合成代谢途径增加甘油的积累
1.3.2降低甘油通过细胞膜的速度
1.3.3调控甘油的分解代谢过程
1.3.4从环境中摄取甘油
1.4 3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)酵母抗高渗过程中的作用及其调控机制
2本研究的目的与意义
3材料与方法
3.1材料、试剂和仪器
3.1.1材料
3.1.2试剂及试剂盒
3.1.3仪器
3.2方法
3.2.1酵母基因组DNA的提取
3.2.2以酵母基因组DNA为模板的PCR扩增
3.2.3扩增产物的纯化与克隆
3.2.4测序克隆片段测序与氨基酸序列分析
3.2.5 RNA的点杂交
3.2.6酵母菌株在高渗胁迫下生长速度的检测
3.2.7点杂交样品的处理
4结果与分析
4.1酵母菌株YY、FHS、WFB耐高渗能力的强弱
4.2 gpd1基因克隆
4.2.1酵母基因组DNA的提取
4.2.2以酵母基因组DNA为模板的PCR扩增
4.2.3将回收的PCR片段与T载体连接并转化到宿主菌
4.2.4筛选并鉴定阳性克隆子
4.3克隆片段与gpd1序列(X76859)间同源性分析
4.4在高渗胁迫下这酵母菌株YY、FHS和WFB的gpd1基因mRNA转录水平的差异
4.4.1探针标记效果的检测
4.4.2对酵母菌株渗透胁迫处理并检查抽提RNA的质量
4.4.3检测样品OD260的数值计算上样量
4.4.4点杂交分析样品mRNA的转录水平的变化趋势
5讨论
5.1菌株耐高渗能力与其gpd1基因序列的关系
5.2 gpd1基因mRNA转录水平的变化趋势与菌株的抗高渗能力的关系
5.3未来工作的方向
参考文献
致谢
附录