储烟仓库中苏云金芽孢杆菌资源及新菌株LY-99的特性研究

摘要

储烟仓库环境富含苏云金芽孢杆菌，且组成上不同于土壤环境，苏云金芽孢杆菌的检出率较高，是许多特异性苏云金芽孢杆菌资源的积聚场所。目前，国内外有关在储烟仓库中分离苏云金芽孢杆菌菌株的研究较少。本文以全国6个不同省份的8个主要卷烟厂为代表，考察了我国储烟仓库中苏云金芽孢杆菌资源分布情况，并对所分离到的苏云金芽孢杆菌新菌株LY-99进行了分子特性研究。 1．储烟仓库中苏云金芽孢杆菌的分离和筛选 本文通过醋酸钠抑制筛选法对采集于全国8个主要卷烟厂（襄樊卷烟厂、武汉卷烟厂、龙岩卷烟厂、厦门卷烟厂，延吉卷烟厂、杭州卷烟厂、昆明卷烟厂和广州卷烟厂）储烟仓库中的578份不同类型的样品进行了苏云金芽孢杆菌的分离和筛选。结果表明，烟叶储藏仓库中苏云金芽孢杆菌资源极为丰富，在其中的238份样品中分离出苏云金芽孢杆菌972株，检出率高达41.18％；不同卷烟厂中苏云金芽孢杆菌的检出率不同，延吉卷烟厂的检出率最高（100％），其次是龙岩卷烟厂（96.15％）、昆明卷烟厂（79.37％）、襄樊卷烟厂（78.95％）、厦门卷烟厂（61.11％）、杭州卷烟厂（29％）、广州卷烟厂（22.81％）和武汉卷烟厂（15.27％）。不同类型的样品的检出率和所分离出的菌株数也存在较大的差别，其中粉尘样品所含苏云金芽孢杆菌资源最为丰富，依次是烟叶碎屑、烟叶和死虫。 2．新菌株LY-99的分子特性研究 初步考察了储烟仓库中苏云金芽孢杆菌分离株对鳞翅目昆虫小菜蛾、甜菜夜蛾、烟草粉螟以及双翅目昆虫韭蛆的生物活性。初步明确了储烟仓库中苏云金芽孢杆菌对供试昆虫的活性差异，并筛选出对小菜蛾、甜菜夜蛾及烟草粉螟具有较高生物活性，同时对双翅目害虫韭蛆也有一定的生物活性的分离株LY-99，为今后商品化开发提供了基础。菌株LY-99的遗传多样性分析结果表明，分离于烟叶储藏仓库中的LY-99是一株新的阿莱亚种菌株（alesti，H3a3c）。以阿莱亚种标准菌株作为对照，进行质粒图谱分析、SDS-PAGE分析、基因型鉴定、PCR-RFLP分析、序列分析以及生物活性测定等。结果表明分离株LY-99虽然和对照菌株具有相同的血清型，但两者的质粒图谱分析、SDS-PAGE分析却不相同；基因型鉴定结果显示菌株LY-99含有丰富的cry1类基因，同时还含有一个cry2基因，而标准菌株只含有一个cryAe基因；PCR-RFLP分析结果表明菌株LY-99含有一个新的cry1类基因，而序列分析表明该基因为一个新的cryLA类基因，已经被苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为crylAh2（基因编号：DQ269474）。而生物活性测定结果显示，菌株LY-99对鳞翅目害虫小菜蛾、甜菜夜蛾和烟草粉螟以及双翅目害虫韭蛆的生物活性明显高于对照菌株的生物活性。

目录

文摘

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论文说明：缩略词表

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第一章文献综述

第二章储烟仓库中苏云金芽孢杆菌的分离和筛选

第三章新菌株LY-99的分子特性研究

参考文献

致谢