不同免疫刺激剂对水产动物免疫功能影响的研究

摘要

本文主要进行了如下几个方面的研究： 1. 本文报道用温酚法分别从柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和叉尾鲴爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(LPS)作为免疫原，分别接种斑点叉尾鲴(Ictaluruspunctatus Rafinsque)后，通过测定受免鱼的交叉凝集抗体效价，头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A．hydrophila活菌细胞内杀菌活性的方法，探讨鱼类3种致病菌的粗LPs对斑点叉尾鲴免疫原性的试验结果。试验结果表明，从3种致病菌中提取的粗LPS对斑点叉尾鲴均具有较强的免疫原性，受免鱼的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体，与对照鱼相比，头肾和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A．hydrophila 活菌杀菌活性明显上升。说明在3种供试菌的粗LPS上不同程度地存在3种致病菌的共同保护性抗原。 2. 从极端嗜冷细菌(Psychrophilic bacteria)中提取菌体脂多糖(1ipopolysaccaride，LPS)和外膜蛋白(outer membrane protein，OMP)，作为保护性抗原，注射接种鲫鱼(Carassius auratus)。不同时间后，通过测定受免鱼血清溶菌酶活性、抗菌活力，酚氧化酶活力和白细胞吞噬活性，以及接种后血液中白细胞的数量变化，检测二种抗原对鲫鱼免疫功能的影响。结果表明，二种抗原对鲫鱼均有较强的免疫原性，受免后各组之间进行比较，免疫组鲫鱼各指标均明显高于对照组。 3. 在饲料中添加0.5％的虫草菌粉，以口服形式对日本沼虾(Macrobrachiumnipponensis)进行免疫。日本沼虾血淋巴白细胞吞噬活性、血清抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后，试验组的免疫保护率也明显提高。因此，投喂虫草菌粉，能够明显地增强日本沼虾的免疫抵抗能力。 4. 在饵料中添加不同含量的免疫增强剂(0.2％，0.5％，0.8％)连续投喂21d。在0，1，4，7，14，21d检测鲫鱼(Carassius auratus)血液白细胞的吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性。结果表明，该免疫增强剂可使鲫鱼血液中白细胞吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性都有明显提高。在停止投喂后7d，血清溶菌酶的活性逐渐降低与对照组无显著差异(P>0.05)，但白细胞吞噬活性依然显著差异于对照组(P<0.05)。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1养殖鱼虾类的免疫机制

2免疫刺激剂的种类与特性

2.1革兰氏阳性菌与菌体肽聚糖

2.2革兰氏阴性菌与菌体LPS

2.3从放线菌中提取的短肽

2.4酵母菌与菌体多糖

3脂多糖(LIPOPOLYSACCHARIDE，LPS)

3.1 LPS的生物学构造

3.2 LPS的生物学特性

3.3致病菌LPS对鱼类的免疫原性

3.4 LPS在鱼体内的吸收和分布

3.5 LPS的佐剂性研究

3.6 LPS的丝裂原性研究

4外膜蛋白(OUTER-MEMBRANE PROTEIN，OMP)

4.1外膜蛋白的生物学结构

4.2外膜蛋白的生物学生理功能

4.3外膜蛋白的致病作用研究

4.4外膜蛋白的免疫学特性研究

5脂多糖和外膜蛋白的提取工艺

5.1 LPS的提取方法

5.2 OMP的提取方法

6影响脂多糖和外膜蛋白表达的因素

6.1环境条件

6.2培养方式

6.3培养温度

6.4提取方法

6.5培养时间

6.6其它因素

7免疫刺激剂在水产养殖中的应用

7.1降低饵料系数，促进生长

7.2提高水产动物的免疫力

8免疫刺激剂的使用时间和添加剂量

9免疫刺激剂的正确使用方法

10存在的问题和未来展望

第二章鱼类3种致病菌粗脂多糖(LPS)对斑点叉尾鮰的免疫原性

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

1.3测定指标及方法

2结果与分析

2.1凝集抗体效价

2.2血液和头肾中吞噬细胞的吞噬活性

2.3血液和头肾中吞噬细胞的杀菌活性

3讨论

第三章极端嗜冷细菌保护性抗原对鲫鱼免疫功能的影响

1材料与方法

1.1材料

1.2试验方法

2结果

2.1保护性抗原对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响

2.2保护性抗原对鲫鱼血清溶菌酶活性、抗菌活力的影响

2.3保护性抗原对鲫鱼血液中白细胞数量的影响

2.4保护性抗原对鲫鱼血清中酚氧化酶活力的影响

3讨论

第四章虫草菌粉对日本沼虾免疫功能的影响

1材料与方法

1.1试验用虾及饲养饲料

1.2金黄色葡萄球菌的制备

1.3溶壁微球菌的制备

1.4攻毒菌液的制备

1.5采血

1.6抗菌活力及溶菌活力的测定

1.7血淋巴白细胞吞噬活性的测定

1.8血清酚氧化酶活力的测定

1.9攻毒试验

2结果

2.1血细胞吞噬活性的影响

2.2血清抗菌活力、溶菌活力及酚氧化酶活力

2.3攻毒试验

3讨论

第五章酵母免疫多糖对鲫鱼细胞吞噬和溶菌酶活性的影响

1材料与方法

1.1酵母免疫多糖的来源

1.2试验鱼及饲养饲料

1.3金黄色葡萄球菌的制备

1.4溶壁微球菌的制备

1.5采血

1.6溶菌酶活性的测定

1.7白细胞吞噬活性的测定

2结果

2.1酵母免疫多糖对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响

2.2酵母免疫多糖对鲫鱼血清和体表粘液溶菌酶活性的影响

3讨论

参考文献

附录

硕士学习期间发表论文情况

致谢