湖北海棠SRAP体系建立及其遗传多样性研究

摘要

本研究首先建立了湖北海棠SRAP标记反应体系，结果表明湖北海棠SRAP-PCR最佳反应体系为：Mg<'2+>2.5mmol/L，Taq酶1.5u，dNTP0.3mmol/L，引物0.3umol/L，Bufferl×，DNA模板30ng，反应总体积25uL。用优化的体系对33份湖北海棠样本进行了扩增分析，所用引物都能扩增出清晰的谱带，且多态性很强。因此，SRAP的引物组合在湖北海棠上适应性很强，SRAP适用于北海棠的遗传多样性研究，也适用于其起源与分类的研究。 从36对引物组合中选择条带清晰、多态性好的引物12对对供试33个基因型进行扩增，片段大小在300-2000bp，每对引物组合产生4-13条谱带，多态性条带占总带数的91.225％。用1个引物不能将所有供试材料区分出来。33个基因型的相似系数在0.5104～0.9271，表明湖北海棠具有遗传多样性。 应用UPGMA法进行聚类分析表明，在L=0.69时，33份供试材料分为5个组，在L=0.63时，分为3个组；主坐标分析显示，33种供试材料分为5个组，除一个材料外，其余材料分组与聚类分析L=0.69时分组情况相同。在聚类的同一组里，有不同来源的湖北海棠样品，而在同一来源地的湖北海棠又有的不能聚在同一组，用主坐标分析有基本相同的结果，表明湖北海棠遗传多样性与地域性没有对应关系，类似于居群内遗传变异规律。平邑甜茶源自山东，却与源自神农架的其它类型聚在一起，可能是人为传播的结果。 此外，供试材料虽有遗传多样性，但部分相似系数还是比较高，有几组对甚至难以区分，而兴山35号却与其它类型差别很大。兴山35号的与其它基因型的亲缘关系有待于进一步研究。

目录

声明

摘要

1.前人研究进展和本课题的研究目的

1.1前人研究进展

1.1.1湖北海棠的特点及其遗传多样性研究进展

1.1.2常用DNA分子标记及其应用

1.1.3 SRAP及其在植物上的应用

1.2本研究的目的和研究内容

2材料与方法

2.1材料

2.2 DNA提取(CTAB法)与纯化

2.3 SRAP-PCR反应体系优化

2.3.1 PCR扩增程序

2.3.2 SRAP-PCR选用引物

2.3.3 SRAP反应参数的优化

2.4 PCR产物检测

2.5引物组合筛选

2.6湖北海棠多样性分析

3结果与分析

3.1湖北海棠SRAP-PCR反应体系的建立

3.1.1三个相互影响的因素的试验

3.1.2引物浓度

3.1.3湖北海棠SRAP-PCR反应体系的确立

3.2湖北海棠SRAP-PCR引物组合筛选

3.3湖北海棠SRAP标记遗传多样性分析

3.4 33个湖北海棠样本的聚类分析

3.5 33个湖北海棠样本的主坐标分析

4讨论

4.1 SRAP反应体系的优化

4.2 SRAP标记及其可靠性

4.3湖北海棠的遗传多样性

4.4对于湖北海棠种质资源研究的展望

参考文献

附录

致谢