三种试剂盒检测盐酸克伦特罗残留的比较研究

摘要

盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CL)是一种β2-肾上腺素受体激动剂,20世纪70年代起,被作为“营养重分配剂”及“促生长剂”用于饲料生产中,借以提高动物瘦肉率和减少脂肪率。但由于盐酸克伦特罗具有吸收快、分布广、脂溶性高以及残留性积累和半衰期长的特性,易在动物体内积蓄残留,造成人食用后引起中毒,我国和欧州等国家都明令禁止在畜牧业生产中使用此药。
　　目前,检测盐酸克伦特罗的方法很多,但应用最广的是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。但盐酸克伦特罗试剂盒对温度和反应时间的要求很严格,本文就是在这种背景下,研究不同的ELISA试剂盒(德国拜发试剂盒、比利时BIX-O试剂盒和北京望尔试剂盒),在不同的温度和反应时间下的差别。试验结果表明:温度对ELISA试剂盒的检测结果影响显著,但在一定温度范围内(20℃-37℃),对检测结果的判断没有影响;反应时间对ELISA试剂盒的影响不显著(反应时间的变化范围为30±5min);3种试剂盒之间差异不显著,这说明不同竞争类型的试剂盒对检测结果没有影响。

目录

摘要

Abstract

1 前言

1.1 盐酸克伦特罗的结构和性质

1.2 盐酸克伦特罗的药理作用

1.3 盐酸克伦特罗的生化功能

1.4 盐酸克伦特罗在机体内的吸收、代谢和残留分布

1.4.1 盐酸克伦特罗在机体内的吸收

1.4.2 盐酸克伦特罗在机体内的代谢

1.4.3 盐酸克伦特罗在机体内的残留分布

1.5 盐酸克伦特罗的残留检测标准

1.6 盐酸克伦特罗检测样品的选择

1.7 盐酸克伦特罗检测样品的前处理

1.8 盐酸克伦特罗的检测方法

1.8.1 高效液相色谱法(HPLC)

1.8.2 气相色谱—质谱法联用法(GC-MS)

1.8.3 毛细管区带电泳法(CE)

1.8.4 酶免疫分析法(IA)

1.8.5 滴金免疫技术(DIGFA)

1.8.6 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)

1.8.7 生物传感器技术(BS)

1.9 酶联免疫吸附测定方法

1.9.1 间接法

1.9.2 双抗体夹心法

1.9.3 竞争法

1.10 商品化盐酸克伦特罗检测试剂盒的原理

2 材料与方法

2.1 试验设计

2.2 试验材料

2.2.1 所需仪器

2.2.2 试剂盒

2.2.3 检测样品

2.3 样品处理

2.4 测定程序

2.4.1 拜发试剂盒测定程序

2.4.2 BIX-O试剂盒测定程序

2.4.3 望尔试剂盒测定程序

3 结果与分析

3.1 试验结果

3.2 三种试剂盒的温度—吸光值曲线分析

3.2.1 拜发试剂盒在25min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.2 拜发试剂盒在30min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.3 拜发试剂盒在35min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.4 BIX-O试剂盒在25min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.5 BIX-O试剂盒在30min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.6 BIX-O试剂盒在35min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.7 望尔试剂盒在25min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.8 望尔试剂盒在30min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.9 望尔试剂盒在35min时的温度—吸光值曲线分析

3.2.10 小结

3.3 三种试剂盒在不同温度下各个反应时间的吸光值分析

3.3.1 拜发试剂盒在20℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.2 拜发试剂盒在25℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.3 拜发试剂盒在30℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.4 拜发试剂盒在37℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.5 BIX-O试剂盒在20℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.6 BIX-O试剂盒在25℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.7 BIX-O试剂盒在30℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.8 BIX-O试剂盒在37℃时各个反应时间吸光值变化分析

3.3.9 望尔试剂盒在20℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.10 望尔试剂盒在25℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.11 望尔试剂盒在30℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.12 望尔试剂盒在37℃时各个反应时间的吸光值变化分析

3.3.13 小结

3.4 三种试剂盒中阳性标样吸光值图分析

3.4.1 三种试剂盒阳性标样在反应时间为25min的吸光值图

3.4.2 三种试剂盒阳性标样在反应时间为30min的吸光值图

3.4.3 三种试剂盒阳性标样在反应时间为35min的吸光值图

3.4.4 小结

3.5 方差分析

3.5.1 温度和试剂盒的可重复双因素分析

3.5.2 反应时间和试剂盒的可重复双因素分析

3.5.3 温度和反应时间的可重复双因素分析

4 讨论

4.1 环境温度对三种试剂盒测定结果的影响

4.2 反应时间对三种试剂盒的影响

4.3 三种试剂盒对检测结果的影响

5 全文小结

参考文献

致谢

德国拜发试剂盒使用说明书

比利时BIX-O试剂盒使用说明书

北京望尔试剂盒(Ⅱ型)使用说明书