月季组织培养及利用ISSR标记进行遗传多态性分析

摘要

月季是我国十大名花之一，栽培历史悠久，优良品种繁多，色彩丰富艳丽，花容花姿秀美，芳香馥郁宜人，四时花开不断，故有“花中皇后”之美称，深受世界人民的喜爱。月季在我国广泛栽培，在城市绿化中起着重要作用。本试验主要研究了月季的再生、扩繁，并利用ISSR分子标记技术分析了月季资源的遗传多样性。主要结果如下： 1.建立了三个切花月季品种和8个微型月季品种的扩繁体系。结果表明最适合月季扩繁的基本培养基为MS，在含较低浓度的NAA(0-0.1mg/L)和BA(0.5-3mg/L)组合的培养基上可以较好地进行扩繁，外植体用茎段优于用茎尖。茎段扩繁系数最高的是‘北京2’，为6.71，最低的为‘白米农’2.73；以茎尖为外植体扩繁的‘金太阳’和‘北京2’扩繁系数都为2.57。 2.研究了几个月季品种的试管苗生根情况。培养基以1/2MS最好，在添加NAA0.01mg/L时，平均生根数为14.67，平均长度为2.53cm。移栽到蛭石中生长最健壮，成活率达99％以上。‘北京6’、‘金太阳’和‘巴西诺’则在添加NAA0.1mg/L水平上生根明显优于在0.05mg/L水平上。 3.几个月季品种再生的优化。基本培养基1/2MS，添加葡萄糖30g/L，植物凝胶2.5g/L，AgNO3(10mg/L)和CH(100mg/L)，‘北京6’再生率最高的激素组合为NAA0.05mg/L和TDZ1.0mg/L，达76％，在NAA0.01mg/L、TDZ0.5mg/L，NAA0.01mg/L、TDZ2.0mg/L，NAA0.05mg/L、TDZ0.5mg/L培养基上再生率也都能达到70％以上；而200660再生率最高的为NAA0.05mg/L、TDZ1.5mg/L组合，再生率为79.2％，其它培养基中再生率低；‘北京2’、‘北京5’在NAA0.01mg/L+TDZ1.0mg/L上再生率最高，分别达到59.7％和57.3％；此外我们还比较了其它14个品种在NAA0.05mg/L、TDZ1.5mg/L的再生率，结果为‘状元红’再生率最高，达53.3％，其次为‘伊丽莎白’和‘黑玫瑰’，分别达41.0％和39.0％，而‘黑夫人’、‘荒城’、‘摩洛哥公主’、‘金奖章’、‘坦尼克’、‘钻石’再生率为0。 4.62个月季品种的ISSR分析。从38个引物中筛选出8个引物，扩增出清晰、稳定条带116条，多态性片段113条。这些片段能将62个材料完全区分开，每个引物扩增的谱带有13-16个，而且扩增谱表现出很高的多态性，表明月季品种之间的遗传多态性很高。并且利用筛选出的8个引物扩增出的116条片段来做聚类分析，绘制了62个供试材料的亲缘关系树状图，聚类结果基本能反映出各类群所含品种遗传背景的一致性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略表

声明

1文献综述

1.1关于月季组织培养的研究

1.1.1关于月季组培快繁技术的研究

1.1.2关于植株再生的研究

1.2月季分类及分子标记

1.2.1蔷薇属植物的演化进程及园艺分类

1.2.2现代月季的分类

1.2.3分子标记

1.3研究意义和目的

2材料与方法

2.1 3个切花月季和8个微型月季品种快繁试验材料方法

2.1.1供试材料和来源

2.1.2试验方法

2.1.3数据处理

2.2月季植株再生的材料方法

2.2.1供试材料和来源

2.2.2方法

2.2.3数据处理

2.3 ISSR分析的材料方法

2.3.1材料及来源

2.3.2方法

3结果与分析

3.1微型月季微繁体系

3.1.1切花月季腋芽的诱导

3.1.2微型月季腋芽的诱导

3.1.3炼苗移栽

3.2植株再生

3.3 ISSR分析结果

3.3.1基因组DNA的提取

3.3.2引物筛选及多态性分析

3.3.3聚类分析

4讨论与结论

4.1讨论

4.1.1扩繁

4.1.2再生

4.1.3分子标记

4.2结论

参考文献

附图

致谢