提高耐热链霉菌转化泰乐菌素能力的分子育种改造

摘要

乙酰异戊酰泰乐菌素(AIV)是一种高效的大环内酯类抗生素，有着很高的工业应用价值。它是通过耐热链霉菌生物转化泰乐菌素，在泰乐菌素的3-OH乙酰基化和4

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语(Abbreviations)

声明

第一章前言

1.1弗氏链霉菌

1.1.1简介

1.1.2Tylosin生物合成

1.2泰乐菌素的衍生物

1.2.1替米考星

1.2.2乙酰异戊酰泰乐菌素(AIV)

1.3耐热链霉菌

1.4本课题研究依据、目的和意义

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1菌株

2.1.2质粒

2.1.3 PCR引物

2.1.4培养基和生化试剂

2.1.5仪器设备

2.2实验方法

2.2.1菌种培养及保藏（Sambrook et al.,2000）

2.2.2大肠杆菌质粒DNA的小量提取

2.2.3大肠杆菌感受态的制备及质粒的化学转化

2.2.4大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测(Sambrook et al.,2000)

2.2.5链霉菌基因组DNA的少量快速提取(Kieser et al.,2000)

2.2.6 PCR反应体系

2.2.7 DNA片段的回收(试剂盒说明书,赛百胜公司)

2.2.8载体的去磷酸化(Sambrook et al.,2000)

2.2.9 DNA连接(Sambrook et al.,2000)

2.2.10大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移(Charter et al.,2000)

2.2.11发酵培养

2.2.12菌体浓度的测定

2.2.13 AIV的测定

第三章结果与分析

3.1摇瓶发酵工艺优化

3.1.1转种量对转化率的影响

3.1.2摇瓶装量对转化率的影响

3.1.3种龄对转化率影响

3.1.4发酵培养周期对转化率影响

3.2 acyB1-B2基因的整合表达

3.2.1构建acyB1-B2基因重组质粒

3.2.2 acyB1-B2基因重组质粒通过接合转移导入耐热链霉菌

3.2.3阳性菌株的筛选和PCR验证

3.2.4 acyB1-B2基因整合表达对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响

3.3红霉素抗性基因ermE的整合表达

3.3.1构建ermE基因重组质粒

3.3.2 ermE基因整合表达及验证

3.3.3 ermE基因整合表达对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响

3.4 nsdA基因中断对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响

3.4.1 nsdA基因中断及其PCR验证

3.4.2 nsdA基因中断菌株形态变化和发酵产物的HPLC分析

第四章总结与讨论

4.1总结

4.2讨论

4.3展望

参考文献

致谢