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缩略语表
1 前言
1.1 苏云金素概况
1.1.1 苏云金芽胞杆菌简介
1.1.2 苏云金素的特性与结构
1.1.3 苏云金素的杀虫机理
1.1.4 苏云金素的分离与纯化
1.1.5 苏云金素的安全性鉴定
1.1.6 苏云金素合成基因的研究现状
1.2 抗生素的合成途径
1.2.1 抗生素的分类
1.2.2 抗生素的作用方式
1.2.3 抗生素的合成方式
1.3 细菌素
1.3.1 细菌素的定义
1.3.2 细菌素的分类
1.3.3 细菌素的生物合成途径
1.3.4 细菌素的转录后修饰、激活和运输
1.3.5 细菌素生物合成的调控
1.3.6 细菌素操纵子的免疫性
1.3.7 细菌素与抗生素的区别
1.4 苏云金芽胞杆菌菌株CT-43简介
1.5 本课题的研究意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株、质粒
2.1.2 培养基
2.1.3 试剂和仪器
2.2 实验方法
2.2.1 DNA常规操作
2.2.2 穿梭载体pEMB0557的构建
2.2.3 菌株CT-43基因组大肠杆菌人工染色体文库(BAC文库)的构建
2.2.4 菌株CT-43质粒BAC文库的构建
2.2.5 菌株CT-43基因组苏云金芽胞杆菌BAC文库的构建
2.2.6 Southern杂交
2.2.7 含有crylB基因的苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB0558的克隆
2.2.8 苏云金素合成基因簇thuABCDEFG的异源表达
2.2.9 苏云金芽胞杆菌CT-43菌株基因中断突变株的筛选
2.2.10苏云金素的分离纯化
2.2.11苏云金素和胞内代谢物的检测
2.2.12序列测定和序列分析
3 结果与分析
3.1 苏云金素合成基因所在的大质粒的定位
3.1.1 苏云金芽胞杆菌菌株CT-43质粒消除突变株的筛选
3.1.2 苏云金芽胞杆菌菌株CT-43及其突变株与crylB基因之间的关系
3.1.3 cry1B基因所在的大质粒的定位
3.2 含有cry1B基因的大质粒pBMB0558的克隆
3.2.1 穿梭载体pEMB0557的构建
3.2.2 苏云金芽胞杆菌菌株CT-43大肠杆菌BAC文库的构建
3.2.3 含有cry1B基因的大质粒pBMB0558重叠连锁群图谱的绘制
3.2.4 质粒pBMB0558的序列测定
3.3 菌株CT-43苏云金芽胞杆菌BAC文库
3.4 苏云金素表达子的筛选
3.4.1 大肠杆菌BAC文库的HPLC筛选
3.4.2 苏云金芽胞杆菌BAC文库的HPLC-MS筛选
3.4.3 功能域的缩短
3.5 苏云金素合成基因簇thuABCDEFG的生物信息学分析
3.6 苏云金素合成途径的推导
3.7 苏云金素合成途径的初步验证
3.7.1 基因簇中的thuE基因的中断实验
3.7.2 thuE基因中断突变株的飞行质谱(TOF-MS)检测
3.7.3 苏云金素生物合成途径的验证
4 讨论
4.1 与苏云金素合成相关的基因
4.1.1 thuA基因
4.1.2 与组装相关的蛋白
4.1.3 苏云金素的产量调控因子
4.1.4 苏云金素的分泌
4.1.5 苏云金素的免疫机制
4.2 苏云金素合成基因簇所在大质粒的功能分析
5 总结和创新点
参考文献
致谢
附录 己发表和待发表论文及专利