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1 文献综述
1.1 沙门氏菌病的流行现状与危害
1.2 沙门氏菌的特征
1.3 沙门氏菌菌毛
1.3.1 沙门氏菌菌毛的类型
1.3.2 沙门氏菌菌毛在细菌致病中的作用
1.4 鼠伤寒沙门氏菌对机体的感染与免疫
1.5 沙门氏菌Ⅰ型菌毛与树突状细胞的相互作用
1.6 沙门氏菌疫苗
1.7 沙门氏菌疫苗载体
1.8 绿色荧光蛋白(GFP)
2 研究目的和意义
2.1 为深入研究沙门氏菌致病机理提供依据
2.2 为设计更加安全高效的沙门氏菌疫苗载体提供理论依据
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 菌株和质粒
3.1.2 药品与试剂
3.1.3 抗体与细胞因子检测试剂盒
3.1.4 主要培养基及其配制
3.1.5 主要试剂与缓冲液的配制
3.1.6 本实验所用PCR引物
3.1.7 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 重组沙门氏菌的构建
3.2.2 GFP的原核表达与纯化
3.2.3 重组沙门氏菌对小鼠的接种剂量确定试验
3.2.4 小鼠的免疫试验
4 结果与分析
4.1 GFP在大肠杆菌中的表达
4.1.1 GFP基因的扩增与克隆
4.1.2 原核表达质粒pET-28a-gfp的构建
4.1.3 GFP在大肠杆菌中的表达与检测
4.2 沙门氏菌重组菌的构建与鉴定
4.2.1 GFP基因的扩增与克隆
4.2.2 重组质粒p33h-gfp与p44h-gfp的构建
4.2.3 重组沙门氏菌的构建
4.3 重组沙门氏菌接种小鼠的剂量确定
4.4 AZB109-p33h-gfp、AZB109-p44h-gfp接种小鼠的免疫反应
4.4.1 沙门氏菌IgG抗体水平检测
4.4.2 沙门氏菌sIgA抗体水平检测
4.4.3 GFP抗体水平检测
4.5 AZB117-p33h-gfp、AZB117-p44h-gfp口服接种小鼠的免疫反应
4.5.1 沙门氏菌IgG抗体水平检测
4.5.2 沙门氏菌sIgA抗体水平检测
4.5.3 沙门氏菌抗原刺激的淋巴细胞增殖分析
4.5.4 沙门氏菌抗原刺激的IFN-γ检测
4.5.5 沙门氏菌抗原刺激的IL-4检测
4.5.6 抗GFP的IgG抗体水平检测
4.5.7 GFP刺激的淋巴细胞增殖分析
4.5.8 GFP刺激的IFN-γ检测
4.5.9 GFP刺激的IL-4检测
4.6 AZB117-p33h-gfp、AZB117-p44h-gfp经皮下注射途径接种小鼠的免疫反应
4.6.1 沙门氏菌IgG抗体水平检测
4.6.2 沙门氏菌sIgA抗体水平检测
4.6.3 沙门氏菌IgM抗体水平检测
4.6.4 沙门氏菌抗原刺激的淋巴细胞增殖分析
4.6.5 沙门氏菌抗原刺激的IFN-γ检测
4.6.6 沙门氏菌抗原刺激的IL-4检测
4.6.7 抗GFP的IgG抗体水平检测
4.6.8 抗GFP的IgM抗体水平检测
4.6.9 GFP刺激的淋巴细胞增殖分析
4.6.10 GFP刺激的IFN-γ检测
4.6.11 GFP刺激的IL-4检测
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢