以豆粕为原料的大豆肽酶解工艺研究

摘要

大豆肽作为一种生物活性肽，因其具有优良的理化性质和高效的生物活性而成为当今的研究热点。本研究通过研究豆粕的酶解工艺，旨在生产出蛋白转化率较高的优质大豆肽，从而使其更好地应用于食品与保健品行业，为绿色低碳的和谐社会贡献力量。
　　 本研究测定了豆粕的基本理化指标:豆粕的pH为6.65，粗蛋白含量为45.89％，三氯乙酸法测得其小分子蛋白（分子量小于10kDa）含量为1.46％。在此基础上，首先选用单一蛋白酶K进行酶解试验，分析表明:该蛋白酶K的最适作用pH为8，最适作用温度为50℃。50℃下，24h内酶活保存率为79％，表明其稳定性较好。单因素试验表明:加酶量100u/g，底物浓度10％，酶解时间24h时，蛋白转化率可达31％。三因素三水平正交试验表明:对蛋白转化率影响程度由大到小的因素依次为加酶量、酶解时间和底物浓度，其中加酶量对蛋白转化率有极显著的影响，正交试验最优条件为底物浓度10％，加酶量120u/g，酶解时间30h，此条件下蛋白转化率可达41.47％。原料预处理试验表明:对豆粕进行蒸煮，蛋白转化率略有提高，3h加热处理后可达44.47％。多酶混合酶解豆粕的研究显示:多酶混合酶解较单一酶酶解效果更好，当中性蛋白酶和蛋白酶K分别添加100u/g，酶解24h时，蛋白转化率可达55.62％。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 豆粕

1．1．1 豆粕的分类

1．1．2 豆粕的营养价值

1．1．3 豆粕的抗营养因子

1．2 肽

1．2．1 肽的概述

1．2．2 生物活性肽

1．3 大豆肽

1．3．1 大豆肽的理化性质

1．3．2 大豆肽的生物活性

1．3．3 大豆肽的应用

1．3．4 大豆肽的生产方法

1．4 酶解法

1．4．1 微生物发酵酶解法

1．4．2 直接酶解法

1．5 课题研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验原料

2．1．2 实验菌种

2．1．3 实验用酶

2．1．4 实验培养基

2．1．5 主要实验药品

2．1．6 实验试剂及体系

2．1．7 实验仪器

2．2 检测方法

2．2．1 蛋白酶酶活力的检测方法

2．2．2 粗蛋白含量的检测方法(凯式定氮法)

2．2．3 肽含量的检测方法(TCA-NSI)

2．2．4 蛋白质降解程度的检测方法(SDS-PAGE)

2．2．5 低聚糖降解情况的检测方法(薄层层析法)

2．2．6 大豆异黄酮含量的检测方法

2．2．7 胰蛋白酶抑制剂含量的检测方法

2．3 实验步骤

2．3．1 豆粕基本理化指标的测定

2．3．2 发酵毕赤酵母工程菌生产蛋白酶K

2．3．3 蛋白酶K最适作用pH和最适作用温度的测定

2．3．4 蛋白酶K酶活随时间变化的测定

2．3．5 蛋白酶K酶解豆粕工艺条件的优化

2．3．6 加热对蛋白转化率的影响

2．3．7 多酶混合酶解豆粕

2．3．8 酶解后样品低聚糖降解情况的检测

3 结果与分析

3．1 豆粕基本理化指标的测定

3．2 酶活力标准曲线的绘制

3．3 蛋白酶K最适作用pH和最适作用温度的测定

3．4 蛋白酶K酶活随时间变化的测定

3．5 中性蛋白酶和胰蛋白酶酶活的测定

3．6 蛋白酶K酶解豆粕工艺条件的优化

3．6．1 加酶量对蛋白转化率的影响

3．6．2 底物浓度对蛋白转化率的影响

3．6．3 酶解时间对蛋白转化率的影响

3．6．4 正交试验结果

3．7 加热对蛋白转化率的影响

3．8 多酶混合酶解豆粕

3．9 酶解后样品低聚糖降解情况的检测

4 讨论

4．1 小结

4．2 大豆肽的检测

4．3 蛋白酶的选择

4．4 计划与展望

参考文献

致谢