转PmHSP25.3基因香石竹植株耐热性研究

摘要

香石竹（DianthuscaryophyllusL.），也称康乃馨(carnation)，观赏价值高，作为四大切花之一，在花卉市场上有很大的销量。原产地中海沿岸，喜阴凉、干燥环境。在我国，夏季高温，会影响到切花品质，因此培育耐热品种是香石竹的重要育种目标之一。本研究是以香石竹品种‘想向’为材料，通过根癌农杆菌介导法向香石竹中导入梅花小热激蛋白PmHSP25.3基因，在抗性筛选、PCR检测基础上，获得转基因植株，并对转基因植株和对照在高温胁迫下生理生化指标的变化进行了相关研究。主要研究结果如下:
　　1、遗传转化研究
　　将香石竹叶片接种在分化培养基MS+1.0mg/LBA+0.3mg/LNAA上预培处理2d，然后用农杆菌侵染8-12min，在含100mmol/LAS的培养基上共培处理3d，转入加有60mg/LKan+400mg/LCef选择培养基上继续培养，当长出的抗性芽高度达1cm左右时，转入MS+0.1mg/LNAA+25mg/LKan+400Cef的生根培养基上生根。在遗传转化时，不同农杆菌菌株侵染带叶基叶片，所得‘想向’抗性芽再生率有较大差异。EHA105菌株侵染所得再生率约达到3.33％，而GV3101约为0.41％。对抗性植株进行DNA提取，PCR检验，在2个株系中检测到目的基因条带。
　　2、高温胁迫耐热性研究
　　将转基因和对照香石竹组培苗进行不同温度处理，结果表明，转基因香石竹幼苗致死温度为49℃，非转化苗为45℃。在38℃高温下，分别胁迫0、2、4、6、8d，胁迫后剪取叶片，冷冻保存，测定其生理生化指标。结果表明:高温胁迫处理后，转基因香石竹组培苗叶片中可溶性蛋白质、可溶性糖含量、SOD活性均高于对照，而叶绿素总量、丙二醛含量低于对照。

目录

声明

摘要

第一部分 文献综述

1 香石竹遗传转化研究进展

1．1 香石竹简介

1．2 香石竹遗传转化研究

2 植物热激蛋白研究进展

2．1 小热激蛋白分类

2．2 小热激蛋白功能

3 植物基因工程

3．1 遗传转化常用方法

3．2 园林植物遗传转化进展

4 植物耐热性鉴定

4．1 外部形态指标

4．2 微观结构指标

4．3 生理生化机制

5 高温胁迫对植物抗氧化酶系统影响

6 研究目的和意义

6．1 研究意义

6．2 研究目的

第二部分 农杆菌介导的香石竹遗传转化

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 培养条件

1．3 实验方法

1．4 转化植株鉴定

1．5 转基因植株的下地栽培

1．6 数据统计与分析

2 结果与分析

2．1 转化体筛选

2．2 不同农杆菌菌株对香石竹转化率的影响

2．3 转化植株的检测

2．4 转PmHSP25．3基因香石竹的生长状况

3 讨论

3．1 香石竹叶片再生率较低

3．2 香石竹假转化体现象

3．3 农杆菌菌株对转化率的影响

3．4 组培苗污染问题

第三部分 高温胁迫下香石竹幼苗生理生化指标研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 致死温度确定

1．3 高温胁迫处理

1．4 生理生化指标的测定

2 结果与分析

2．1 致死温度确定

2．2 高温胁迫对转基因香石竹和对照可溶性糖的影响

2．3 高温胁迫对转基因香石竹和对照可溶性蛋白含量的影响

2．4 高温胁迫对转基因香石竹和对照叶绿素总含量的影响

2．5 高温胁迫对转基因香石竹和对照SOD活性的影响

2．6 高温胁迫对转基因香石竹和对照丙二醛的影响

3 讨论

3．1 高温胁迫对转基因与对照幼苗可溶性物质积累的影响

3．2 高温胁迫对转基因与对照幼苗叶绿素总量的变化

3．3 高温胁迫对转基因与对照幼苗抗氧化系统的影响

参考文献

致谢