Sirt1对间充质干细胞成脂分化能力的调控

摘要

间充质干细胞(MSC)是干细胞家族的成员之一，作为一种成体干细胞，MSC能分化为肌肉、脂肪、骨骼等成体细胞。近年来越来越的研究重点放在了MSC的自我跟新能力以及分化潜能的调控机制上。Nanog、sox2以及oct4被证实在MSC的干性维持中具有不可替代的作用。MSC在诸多研究中还被证实可以用于诸多疾病的治疗，如神经性疾病、肺损伤、脊髓损伤以及在再生医学领域。
　　沉默信号调节因子(sirt1)是近年发现的sirtuin家族成员之一，它在NAD+辅助下进行对靶基因的脱乙酰化作用，从而参与到机体诸多代谢通路当中。在sirt1对于干细胞的调控研究单中，诸多研究显示sirt1是有利于干细胞的增殖和分化潜能保持的。在造血干细胞中sirt1也是起着维持功能以及避免DNA损伤等重要功能。但是关于sirt1在MSC中调控MSC的成脂分化的相关研究很少，相关机制并不清楚。
　　本文通过使用sirt1酶活的特异性抑制剂ex527，利用real-timepcr、β半乳糖苷酶染色以及油红O染色等方法，研究了sirt1在MSC成脂分化中的作用。获得如下结果:
　　1、Sirt1酶活抑制剂(ex527)可影响分化启动后的MSC细胞的成脂分化效率;而Sirt1激动剂白藜芦醇则不影响其分化效率;
　　2、抑制nampt酶活能显著抑制C3H10t成脂分化的效率;
　　3、Sirt1抑制剂(NAM)处理分化中的C3H10t会加速细胞衰老;
　　4、Sirt1酶活抑制剂(ex527)除了引起C3H10t细胞成脂分化效率降低外，也导致炎症信号通路相关基因(IL-6、cox2)的上调及自噬通路(atg5、atg7、beclin1)和蛋白酶体信号通路(foxo4、psmd11)相关基因的下调。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略语表

1 前言

1．1 间充质干细胞

1．1．1 nanog、sox2、oct4对于干细胞的重要性

1．1．2 MSC的成脂分化

1．1．3 影响MSC分化的信号通路以及相关因子

1．1．4 MSC的医学应用前景

1．2 沉默信号因子(sirt1)

1．2．1 sirt1的相关功禽皂

1．2．2 sirt1与干细胞

1．2．3 sirt1与成脂分化

1．2．4 sirt1的抑制剂与激动剂

1．3 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 主要仪器、试剂和工作液

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要试剂

2．2．3 主要工作液

2．2．4 常用生物学软件

2．3 实验方法

2．3．1 细胞分离、培养及分化

2．3．2 细胞转染

2．3．5 RNA提取及反转录

2．3．6 实时荧光定量PCR

2．3．6 骨髓间充质干细胞的分离

2．3．7 数据处理及误差分析

3 结果与分析

3．1 SIRT1在原代MSC中下调nanog及sox2

3．2 sirt1对C3H10t细胞系干性基因的调控

3．3 抑制sirt1酶活对C3H10t细胞系成脂分化能力的影响

3．4 白藜芦醇以及Nampt抑制剂(Fk866)对于C3H10t成脂分化能力的影响

3．5 NAM处理成脂分化中的C3H10t将会加速细胞衰老

3．6 Sirt1抑制剂(ex527)处理启动分化后的C3H10t细胞引起其它通路基因改变

4 讨论

5 结论与创新点

5．1 结论

5．2 创新点

参考文献

致谢