子宫内膜MMP-2和TIMP-2表达的变化奶牛慢性子宫内膜炎的影响

摘要

基质金属蛋白酶2(MMP-2)是一种蛋白水解酶;它能够水解细胞外基质中的多种成分，其主要功能是组织和重塑ECM。MMP-2的自然组织抑制剂为TIMP-2，它可以结合不管是有活性的还是无活性的MMP-2，从而使MMP-2的活动中止，继而有效的使MMP-2的胶原和明胶水解的活性降低了，最终抑制了癌细胞或子宫内膜细胞的转移和侵袭。试验调查显示，在正常情况下，在MMP-2和TIMP-2的相互作用下，它们是处于平衡协调的关系。白细胞介素-10是经过Th2分泌的人分子，能够降低Th1的功能，具有很强的抗炎作用，为抗炎因子。前列腺素E2(PGE2)是一种促炎细胞因子，它不仅能促进Th1细胞和Th1型T细胞的分化增加，进而促进炎症反应;而且可以抑制免疫反应和细胞吞噬、中性粒细胞聚集与迁移。研究显示，IL-10和PGE2与哺乳动物体内MMP-2、TIMP-2存在密切的联系，奶牛子宫内膜ECM的降解和重组受到MMP-2与TIMP-2的密切调控。因此，研究MMP-2、TIMP-2对奶牛子宫内膜炎的影响，可以调控奶牛子宫内膜炎的发生发展及其疾病的防治提供新的理论基础和实验依据。
　　本实验选用健康荷斯坦奶牛的对照组和患有子宫内膜炎荷斯坦奶牛的试验组各10头，采取血液以及子宫内膜组织。用ELISA方法检测血清白细胞介素-10与前列腺素E2。所取的子宫内膜组织一部分用于提取总RNA，并在反转录之后采用荧光定量PCR法检测基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶组织抑制剂-2的mRNA表达水平;另一部分是用于免疫组化法测定基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶组织抑制剂-2在蛋白水平上的分泌。运用SPSS Statistics17.0分析实验结果。
　　实验结果显示:
　　1.健康荷斯坦奶牛组中PGE2浓度为1.47×103±80.29ng/L，IL-10含量为48.41±5.45 ng/L;而患有子宫内膜炎的荷斯坦奶牛组中PGE2的浓度为0.93×103±21.99ng/L，IL-10含量为78.45±2.55 ng/L。实验组中PGE2浓度极显著低于对照组(P＜0.01);而IL-10含量显著高于对照组(P＜0.01)。
　　2.试验组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶组织抑制剂-2mRNA水平均极显著低于对照组(P＜0.01)。
　　3.健康组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶组织抑制剂-2的蛋白水平用IOD值表达，分别为(10.452±1.231)×103、(8.367±1.324)×103;而患有子宫内膜炎组分别为(5.432±0.587)×103、(4.287±0.536)×103。因此，健康组中MMP-2与TIMP-2在蛋白水平表达都高于对照组，差异极显著(P＜0.01)。
　　实验结果表明，子宫内膜炎病牛中IL-10的含量升高、PGE2的含量降低，子宫内膜中MMP-2、TIMP-2低表达，从而引起ECM供给奶牛子宫内膜细胞的平衡稳态得到了破坏，促进了对子宫内膜炎的产生和发展。说明它们之间存在着密切的联系，这还需要进一步的实验予以证明。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略词表

第一部分 文献综述

1 奶牛子宫内膜炎的研究进展

1．1 奶牛子宫内膜炎的危害

1．2 奶牛子宫内膜炎的诊断

1．3 奶牛子宫内膜炎的病原

1．4 奶牛子宫内膜炎的病因

1．5 奶牛子宫内膜炎的治疗

1．6 奶牛子宫内膜炎的预防

2 基质金属蛋白酶的研究进展

2．1 基质金属蛋白酶的简介

2．2 基质金属蛋白酶的激活与抑制

2．3 基质金属蛋白酶的调节

3 基质金属蛋白酶组织抑制剂的研究进展

3．1 基质金属蛋白酶组织抑制剂的概况

3．2 基质金属蛋白酶组织抑制剂的临床应用

4 白细胞介素10的研究进展

4．1 白细胞介素10的简介

4．2 白细胞介素10的生物学作用

4．3 白细胞介素10与炎症反应

5 前列腺素E2对免疫细胞及炎症的研究进展

5．1 前列腺素E2的简介

5．2 前列腺素E2对免疫细胞的影响

5．3 前列腺素E2与炎症性疾病

6 免疫组化技术

6．1 免疫组化技术原理

6．2 免疫组化技术的应用

第二部分 实验研究

1 前言

2 实验材料

2．1 实验动物

2．2 样品采集

2．3 主要试剂及耗材

2．4 主要仪器设备

2．5 主要溶液的配置

3 实验方法

3．1 血清IL-10和PGE2浓度的检测

3．2 组织总RNA的提取

3．3 总RNA反转录成cDNA

3．4 基因引物的设计

3．5 相对荧光定量PCR

3．6 HE染色

3．7 免疫组化

3．8 统计学分析

4 实验结果与分析

4．1 ELISA的检测结果

4．2 相对荧光定量Q-PCR结果

4．3 HE染色的结果

4．4 免疫组化的结果

5 讨论

5．1 IL-10和PGE2之间的联系及在子宫内膜炎的关系

5．2 MMP-2和TIMP-2在子宫内膜炎中存在的关系

5．3 IL-10、PGE2、MMP-2和TIMP-2共同在子宫内膜炎的作用

6 结论

参考文献

致谢