喹赛多对猪和鸡沙门氏菌感染的临床疗效研究

摘要

猪鸡沙门氏菌病是由致病性沙门氏菌引起的胃肠道疾病，在集约化养殖场发病率较高，生产成本的增加和生产力的下降给畜禽养殖业造成严重的经济损失。由于临床分离沙门氏菌耐药性的状况的愈发严重，需开发新的药物解决这一问题。喹赛多是一种喹噁啉类新药，厌氧条件下对沙门氏菌具有良好的抗菌作用，且其在动物体内消化道的药物浓度十分高，因此开发喹赛多作为防治畜禽沙门氏菌病的新药具有可观的前景。本课题首先通过喹赛多对猪沙门氏菌 PK-PD同步模型的研究制定了喹赛多防治猪沙门氏菌病的推荐给药方案，并用动物实验加以验证；而后基于谭元燕完成的喹赛多对鸡沙门氏菌的 PK-PD同步模型推荐的给药方案，进行喹赛多对鸡沙门氏菌病的随机对照试验和田间试验。本课题制定了喹赛多防治猪沙门氏菌病的给药方案，评价了喹赛多对鸡沙门氏菌病的临床疗效，为喹赛多防控猪和鸡沙门氏菌病的临床用药提供科学依据。
　　本研究主要内容包括：⑴采用琼脂稀释法测定了喹赛多对125株猪沙门氏菌的最小抑菌浓度（MIC， minimum inhibitory concentration），结果显示MIC50为64μg/mL，MIC90为128μg/mL。结合体外药效学数据和致病性试验的结果，选取了敏感致病性猪沙门氏菌 S4443作为试验菌株进行后续研究。在 MH肉汤和猪回肠内容物中喹赛多对猪沙门氏菌S4443的最小抑菌浓度（MIC）均为2μg/mL，最小杀菌浓度（MBC， minimum bactericidal concentration）均为4μg/mL。在含有不同浓度喹赛多的琼脂平皿上涂布1010 CFU/mL的猪源沙门氏菌S4443菌液测得防突变浓度（MPC， mutant prevention concentration）为64μg/mL。将猪沙门氏菌S4443与不同浓度的喹赛多分别孵育1h和2h后进行细菌恢复生长动力曲线的绘制，测得喹赛多对猪沙门氏菌S4443的抗菌后效应（PAE，post-antibacterial effect）在分别孵育1 h和2 h后依次为：0.11~1.02 h，1.26~2.15 h。分别在含有不同浓度喹赛多的MH肉汤和猪回肠内容物样品中进行了体外和半体内条件下喹赛多对猪沙门氏菌S4443的杀菌曲线试验，体外和半体内条件下喹赛多对猪沙门氏菌S4443的抗菌作用类型均为浓度依赖型。⑵选取12头体重约20kg的断奶仔猪，随机分为2组，健康组和患病组各6头。首先通过手术构建仔猪回肠瘘管模型，再对患病组猪只人工攻毒建立沙门氏菌患病模型。健康组和患病组均灌服30 mg/kg体重的喹赛多，给药后0.5、0.75、1、2、3、4、5、6、8、12和24 h采集猪回肠内容物，经样品前处理后用高效液相色谱法检测不同时间点喹赛多的浓度。⑶利用抑制型 Sigmoid Emax模型对半体内条件下健康组和患病组的AUC24h/MIC值与沙门氏菌数量变化的对数值进行拟合，得到健康组和患病组的模型参数：Emax分别为2.73和2.82，E0分别为-5.23和-4.91，EC50分别为35.53和30.60，模型方程健康组为E=2.73-7.96×C2.68/C2.68+35.532.68；患病组为E=2.82-7.73×C2.52/C2.52+30.602.52。预防（E=0）、治疗（E=-3）和根除（E=-4）目的下AUC24h/MIC折点值：健康组依次为27.85、53.14、66.98 h；患病组依次为20.29、47.64、68.14 h。由于患病组更贴近实际用药对象，按照患病组AUC24h/MIC的折点值，根据剂量计算公式得到，当喹赛多对致病沙门氏菌的 MIC=2μg/mL，临床推荐的按体重给药的预防剂量为10.39 mg/kg，治疗剂量为24.38 mg/kg，根除剂量为34.88 mg/kg。基于细菌的生长动力学机制的PK-PD模型进行不同给药方案下的疗效预测得到治疗剂量下以24 h给药间隔能达到预期疗效。临床推荐采用混饲给药，为方便临床用药，预防、治疗和根除日给药剂量对应的馄饲剂量分别为200、500和700 mg/kg。而后采用制定的治疗给药方案对人工感染的猪沙门氏菌病病例进行治疗，结果显示喹赛多用药组的治愈率为83.3％，无死亡病例，验证了给药方案的有效性。⑷选取210羽7日龄肉用仔鸡随机分为6组，每组30羽，每组三个重复。分组依次为：健康对照组，既不感染也不给药；感染对照组，仅人工感染不给药；喹赛多低剂量组，人工感染后按200 mg/kg剂量混饲给药；喹赛多中剂量组，人工感染后按400 mg/kg剂量混饲给药；喹赛多高剂量组，人工感染后按800 mg/kg剂量混饲给药；对照药物新霉素组：人工感染后按100 mg/kg剂量混饲给药。在人工感染鸡沙门氏菌CVCC528两天后80%以上的鸡只出现鸡沙门氏菌病典型症状，连续用药5天后喹赛多低剂量组治愈率为50%，料肉比相比于健康组降低了8.59%；喹赛多中剂量组治愈率达到76.67%，料肉比相比于健康组显著降低了13.64%；喹赛多高剂量组治愈率达到90%，料肉比相比于健康组显著降低了12.12%；对照药物组治愈率达到86.67%，料肉比相比于健康组降低了3.54%。从以上结果看出喹赛多中剂量和高剂量组对治疗鸡沙门氏菌病有显著地疗效，喹赛多高、中、低剂量组均具有明显的促生长的作用，喹赛多高剂量组与新霉素组的治愈率无显著差异，但显著地提高了饲料转化率。因此临床推荐治疗鸡沙门氏菌病的给药方案为400~800 mg/kg，建议以200 mg/kg作为预防剂量防控沙门氏菌的感染。⑸田间试验在湖北省宜昌市昌伟饲料有限公司仓屋榜养殖小区进行。试验选用了20000只1日龄科宝肉鸡，体重40±3 g，随机分为喹赛多组和对照组，每组10000只。对照组饲喂普通商品粮，喹赛多组在商品粮基础上添加150 mg/kg喹赛多，试验周期42 d。对照组鸡只死淘率为5.72%，平均日增重为64.45 g，料肉比为1.75；喹赛多组鸡只死淘率为4.98%，平均日增重为65.76，料肉比为1.60。结果显示，喹赛多组鸡只死淘率和料肉比均低于对照组，表明喹赛多具有良好的防控疾病的效果，可提高鸡只的生产性能。

目录

声明

缩略语表

1 前言

1.1 立题依据

1.2 国内外研究进展

1.3 研究内容与目标

2 材料与方法

2.1 药品与试剂

2.2 主要仪器与设备

2.3 菌种与动物

2.4 喹赛多对猪沙门氏菌的PK-PD同步模型研究

2.5 喹赛多对鸡沙门氏菌病的随机对照试验

2.6 喹赛多对鸡沙门氏菌病的田间试验

3结果与分析

3.1 临床分离致病菌的筛选

3.2 喹赛多对猪沙门氏菌的药效学研究

3.3 喹赛多在猪肠道的药代动力学研究

3.4 PK-PD模型的构建

3.5 给药方案的制定

3.6 模型验证

3.7 喹赛多对鸡沙门氏菌的治疗作用

3.8 喹赛多对鸡沙门氏菌的田间试验

4 讨论

4.1 喹赛多对沙门氏菌的药效学研究

4.2应用回肠瘘管技术进行喹赛多在猪消化道药动学研究

4.3 喹赛多对猪沙门氏菌半体内PK-PD模型的拟合

4.4 喹赛多防治猪沙门氏菌病临床群体给药方案

5全文总结

6 文献综述-畜禽沙门氏菌防治研究进展

6.1 病原学

6.2 临床诊断

6.3 实验室诊断

6.4 沙门氏菌防治

6.5 沙门氏菌防治存在的问题

6.6 展望

参考文献

致谢

附录

附录Ⅰ- 研究生简介

附录Ⅱ- 相关数据和图表