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摘要
缩略语表(Abbreviation)
第一章文献综述
1．1猪肺炎支原体研究进展
1．2猪肺炎支原体的病原学研究
1．3猪肺炎支原体的致病机制
1．3．1猪肺炎支原体在呼吸道的增殖
1．3．2猪肺炎支原体与宿主的相互作用
1．3．3猪肺炎支原体引起的临床症状和肺部病变
1．4猪肺炎支原体的流行病学调查
1．5预防和治疗猪肺炎支原体的感染
1．5．1疫苗预防
1．5．2抗生素治疗
1．6猪肺炎支原体的诊断方法
1．7猪肺炎支原体菌株的多样性
1．8小结与展望
第二章M．hyopneumoniae ES-2株的分离培养及致病性研究
2．1研究的目的与意义
2．2实验材料
2．2．1菌株来源
2．2．2病料的来源
2．2．3实验动物
2．2．4主要试剂及试剂盒
2．2．5培养基及抗生素溶液的配制
2．2．6主要溶液及其配制
2．2．7主要实验器材
2．2．8引物
2．3实验方法
2．3．1猪肺炎支原体的分离方法(多点采样，分别培养)
2．3．2最佳离心力的选择
2．3．3猪肺炎支原体全基因组提取操作步骤
2．3．4 PCR产物的回收与纯化
2．3．5猪肺炎支原体的保存和复苏
2．3．6颜色变化单位(Colour Change Unit，CCU)的测定
2．3．7最小抑菌浓度(MIC)
2．3．8猪肺炎支原体ES-2株的CCU与培养基pH的关系
2．3．11猪肺炎支原体ES-2株菌落形态
2．3．12 ELISA操作步骤
2．3．13猪肺炎支原体ES-2株的毒力评估实验
2．3．14攻毒后观察临床信号
2．4结果与分析
2．4．1临床样品的选择及处理方法
2．4．2 M．hyopneumoniae ES-2株的分离和鉴定
2．4．3 M．hyopneumoniae ES-2株的形态特征
2．4．4选择M．hyopneumoniae ES-2株生长的最佳培养基
2．4．5不同转接量对M．hyopneumoniae ES-2株生长的影响
2．4．6 M．hyopneumoniae ES-2株的生长特性与pH的对应关系
2．4．7通过时间、pH及颜色变化定量液体培养基中的M．hyopneumoniae ES-2
2．4．8临床常用药物对M．hyopneumoniae ES-2株的最小抑菌浓度(MIC)
2．4．9 M．hyopneumoniae ES-2株在固体培养基上的生长特征
2．4．10 M．hyopneumoniae ES-2株对猪致病性的研究
2．4．11不同感染剂量M．hyopneumoniae ES-2株在猪肺组织中的定殖能力
2．4．12 7×107 CCU的M．hyopneumoniae ES-2感染剂量可引起最严重的猪支原体肺炎
2．5讨论
2．5．1猪肺炎支原体的分离方法
2．5．2最小抑菌浓度(MIC)
2．5．3猪肺炎支原体ES-2株在改良Friis培养基中具有生长速度快且生长滴度高等优点
2．5．4猪肺炎支原体ES-2株是一株高致病性菌株
2．6小结
第三章M．hyopneumoniae ES-2株的全基因组测序及致病性相关因子的挖掘
3．1研究的目的与意义
3．2实验材料
3．2．1菌株来源
3．2．2主要实验用试剂
3．2．3主要实验器材
3．2．4猪肺炎支原体培养基的配制
3．2．5主要溶液的配制
3．3实验方法
3．3．1猪肺炎支原体ES-2株基因组的大量提取方法
3．3．3猪肺炎支原体ES-2株基因组序列组装
3．3．6猪肺炎支原体基因组共线性(结构变异)分析
3．3．7分离自不同宿主体内的162株支原体全基因组进化树分析
3．3．8致病性猪肺炎支原体特有基因的筛选
3．4结果与分析
3．4．2 M．hyopneumoniae ES-2株全基因组的测序与组装
3．4．3比较ES-2株与已报道9株M．hyopneumoniae基因组的基本特征
3．4．4 M．hyopneumoniae全基因组相似性分析
3．4．5通过与VFDB毒力因子数据库比较，挖掘M．hyopneumoniae ES-2株中的毒力因子
3．4．6对不同宿主来源支原体全基因组的进化分析
3．4．7通过比较基因组学挖掘致病性M．hyopneumoniae的特有基因
3．5讨论
3．5．2猪肺炎支原体的全基因组的共线性分析及对ES-2株毒力因子的挖掘
3．5．3支原体的遗传进化分析及挖掘致病性猪肺炎支原体的共有基因
3．6小结
第四章M．hyopneumoniae ES-2株灭活疫苗免疫保护效果的评价
4．1研究的目的与意义
4．2实验材料
4．2．1实验用菌株
4．2．2实验用猪肺炎支原体疫苗
4．2．3实验动物
4．2．4主要试剂及试剂盒
4．2．5培养基及抗生素溶液的配制
4．2．6主要溶液及其配制
4．2．7实验用器材
4．2．8引物
4．3实验方法
4．3．1评估M．hyopneumoniae ES-2株灭活疫苗对猪的免疫保护实验方案
4．3．2M．hyopneumoniae ES-2株灭活疫苗的制备
4．3．3猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫接种及攻毒实验
4．3．4猪肺组织病变评分方法
4．3．5猪肺炎支原体血清的收集方法
4．3．6检测免疫后猪体内抗体水平
4．3．7 HE染色及对猪肺组织气管或支气管上皮细胞纤毛观察
4．4．2感染M．hyopneumoniae ES-2株免疫组中实验动物体温变化
4．4．3感染M．hyopneumoniae ES-2株前后，免疫组和非免疫组中实验动物体重变化比较
4．4．4感染M．hyopneumoniae ES-2株前后，免疫组和非免疫组中实验动物咳嗽变化比较
4．4．6通过肺部病变比较不同剂量灭活M．hyopneumoniae ES-2抗原对猪的免疫保护效果
4．4．7扫描电镜观察疫苗对气管或支气管上皮细胞绒毛的保护效果
4．4．8综合评估不同剂量灭活疫苗的保护效果
4．4．9血液和支气管灌洗液中M．hyopneumoniae抗体的产生情况
4．5讨论
4．5．1免疫M．hyopneumoniae ES-2株灭活疫苗后猪体内的抗体水平
4．5．3 M．hyopneumoniae ES-2株灭活疫苗的保护效率
4．6小结
第五章猪链球2型菌荚膜多糖合成相关基因的研究
5．1猪链球2型菌的研究进展
5．1．1猪链球2型菌的流行病学调查
5．1．2猪链球2型菌的毒力因子
5．1．3研究的目的与意义
5．2实验材料
5．2．1菌株、质粒、细胞及培养条件
5．2．2主要试剂
5．2．3培养基与抗生素的配制
5．2．4主要缓冲溶液的配制
5．2．5引物
5．2．6实验动物
5．3实验方法
5．3．1自杀性重组质粒的构建
5．3．2猪链球菌2型基因缺失突变株的构建
5．3．3突变株和野生株的体外生长特性研究
5．3．4透射电镜观察野生株和突变株表面的CPS
5．3．5猪链球2型菌表面唾液酸的提取
5．3．6 RNA提取方法
5．3．7 qPCR
5．3．8测定突变株和野生株的半数致死量(LD50)
5．3．10对Hep-2细胞的黏附和侵入实验
5．3．11抗吞噬实验
5．3．12补体激活实验
5．4结果与分析
5．4．1 Δcps2E、Δcps2L、Δcps2J和Δcps2G突变株的构建及鉴定
5．4．2通过qPCR检测基因的缺失是否影响其他基因的转录水平
5．4．3基因cps2E，cps2L，cps2J或cps2G的缺失对其生长的影响
5．4．4基因cps2E，cps2L，cps2J和cps2G的缺失对S．suis 2表面荚膜多糖的影响
5．4．5测定突变株和野生株(半数致死量)LD50
5．4．6比较突变株和野生株SC19在小鼠体内的定殖能力
5．4．7突变株和野生株对Hep-2细胞黏附和侵入能力比较
5．4．8突变株和野生株抗细胞吞噬能力的比较
5．4．9比较补体C3b在突变株和野生株表面的沉积情况
5．5讨论
5．5．1四个cps基因分别缺失改变了S．suis 2 SC19表面CPS结构
5．5．2 S．suis 2表面CPS缺失导致其毒力显著下降
5．6小结
结论
参考文献
附录
发表文章
致谢
