人类组氨酰tRNA合成酶类似物基因的克隆及功能分析

摘要

用SMART<'TM>方法建立人18周胎脑的cDNA文库,然后从中挑选克隆进行测序.测序引物为M135′通用引物.在测序中发现克隆号为0166c04的5′EST在核酸数据库GenBank/EMBL/DDBJ中没有同源性大于95﹪的基因,对该克隆进行引物行走（primerwalking）,得到全长.得到的序列送到核酸数据库GenBank,登陆号为AF332356.生物信息分析该序列与许多生物如葡萄球、酵母、果蝇及小鼠的推测蛋白同源性较高,这些序列都含有保守但尚未研究的一个结构域.由于该序列与已命名的葡萄菌tRNA合成酶的N端147个氨基酸同源58﹪,因此将其命名为为人类氨酰tRNA合成酶类似物基因.据RT-PCR知该基因在胎脑、成人脑、脾、睾丸、卵巢中表达较高,在胎儿肝、骨骼肌、肺、胸腺、心、肾及成人肝、骨骼肌、肺、胸腺、心、肾、前列腺、小肠、结肠、白细胞等组织中无表达.利用绿荧光蛋白在COS7细胞中将拟编码的蛋白定位在细胞浆中.芯片杂交分析其主要在肺癌、前列腺癌中表达高于相应的正常组织.受到EGF刺激的疤痕组织成纤维细胞中表达下调.ORF克隆到表达质粒pQE30,高水平表达分子量约为24.3kD的蛋白质,经HisTrap亲合层析分离纯化后,制备抗体并进行抗体效价测定.酶母双杂交钓到其相互作用的蛋白是DNA拓扑异构酶Ⅱβ,这提示了该类蛋白作用.为进一步的研究提供了基础.

目录

文摘

英文文摘

第一部分:人类组氨酰tRNA合成酶类似物基因的克隆及功能分析

引言

材料

方法

结果

讨论

参考文献

第二部分综述新基因的克隆及功能研究

基因克隆方法

基因的研究内容和研究方法

致谢

附录1在读期间发表文章情况