自噬在长春瑞滨诱导肺癌细胞系A549细胞死亡中的作用

摘要

目的:研究自噬机制在长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中的作用,初步探讨自噬的作用机制。
　　方法:以不同浓度的长春瑞滨处理人肺癌细胞A549细胞,采用MTT法检测长春瑞滨对A549细胞增殖的抑制作用;应用LC3免疫荧光染色和透射电镜观察给药后自噬的发生;流式细胞仪定量检测自噬特异性蛋白LC3的表达;AnnexinV-FITC流式细胞术检测细胞凋亡;自噬特异性阻滞剂3-甲基腺嘌呤和长春瑞滨共同作用细胞后检测细胞死亡率、自噬率与凋亡率的变化。
　　结果:长春瑞滨对A549细胞生长具有显著的抑制作用,此作用呈明显的时间、剂量依赖性;24h时IC50为5.5umol/L;长春瑞滨处理肺癌细胞早期(24h)可出现明显的自噬性变化,表现为LC3点状散布于细胞膜周围和电镜下广泛的自噬性空泡的出现,自噬高峰期出现于长春瑞滨诱导6-12h;在长春瑞滨给药前阻断自噬,长春瑞滨对A549细胞的毒性作用增强,而在其给药后阻断自噬则长春瑞滨对 A549细胞的细胞毒性作用有所减弱;在长春瑞滨给药前用3-MA预先阻断自噬,与长春瑞滨单独给药组相比细胞凋亡发生率增加;而在长春瑞滨给药后加入3-MA阻断自噬,与长春瑞滨单独给药组相比细胞凋亡率下降。
　　结论:长春瑞滨不但诱导肺癌细胞凋亡,而且能够诱导肺癌细胞自噬的发生;在长春瑞滨给药早期,自噬对细胞有保护作用,可作为一种防御机制抵御环境变化对细胞造成的损伤,延迟凋亡的发生;而在长春瑞滨给药后期,自噬作为一种细胞的死亡程序,与凋亡一起促进细胞死亡。

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前言

第一部分 长春瑞滨诱导A549细胞发生自噬

第一节 长春瑞滨对A549细胞增殖的抑制作用

第二节 长春瑞滨诱导A549细胞自噬性活化

第二部分 自噬在长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中的作用

第一节 3-MA对长春瑞滨诱导A549细胞死亡的影响

第二节 长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中自噬与凋亡的关系

讨论

结论

参考文献

综述 自噬和自噬性细胞死亡与肿瘤的关系及研究进展

附录 硕士期间发表的文章

致谢